反应五要素:
西尼罗河病毒(WNV)核酸检测试剂盒方法参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是Z末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
使用及效果:
将压碎的一小片重量约在100 mg 左右的植物种子(约1/4 黄豆大小)或直径约为0.5-0.7 cm(或面积相当的其他形状)的植物叶片直接加到新鲜配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保温10-15 分钟,加入0.1 mL 溶液B,混匀,直接取上清液(相当于PCR 体积的1/10)作为模板进行PCR。剩余样品可以放4℃保存。
产品名称 | 规格 | 分类 |
西尼罗河病毒(WNV)核酸检测试剂盒方法 | 48T | PCR检测试剂盒 |
样本采集、存放及运输:
1、样本采集:各类型样本按照常规方法采集;
2、存放:样本在2~8℃条件下保存应不超过72h,-70℃以下可长期保存,但应避免反复冻融(Z多冻融3次);
3、运输:采用泡沫箱加冰密封进行运输。
普通PCR反应流程:
自备物品:
西尼罗河病毒(WNV)核酸检测试剂盒方法15毫升锥形离心管:用于制备样品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶标板:用于比色的容器
分光光度仪:用于比色分析
酶标仪:用于微量样品比色分析
储存条件:
14℃或-20℃
准备物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀释液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
产品说明书 1份
1,5-萘二磺钠英文名称:1,5- naphthalene two sulfonic acidCAS号:1655-29-4分子式:332.25334分子量: C10H6Na2O6S2
聚(甲)硅烷支撑钯/氧铝混合催剂分子式:分子量:英文名称:Poly (Jia Benji) silane supported palladium / alumina catalystCAS号:#$!!#
三氯三乙络铝分子式:247.51分子量: C6H1l2Cl3英文名称:Three chlorine three ethylCAS号:12075-68-2
间二(三氟甲)分子式:214.11分子量: C8H4F6英文名称:Between two (three f) benzeneCAS号:402-31-3
对溴甲分子式:171.04分子量: C7H7Br英文名称:To bromine tolueneCAS号:106-38-7
西瑞香素英文名称:DaphnoretinCAS号:2034-69-7分子式:352.3分子量:C19H12O7
二磷酸钾分子式:224.28分子量: C12H10KP英文名称:Two phenyl potassium phosphateCAS号:15475-27-1
性兰英文名称:Acid blueCAS号:2379-74-0分子式:393.31分子量: C18H10Cl2O2S2
2,6-二氯-3-羟-4-吡甲醛分子式:192分子量: C6H3Cl2NO2英文名称:2,6- two -3- hydroxy -4- pyridine formaldehydeCAS号:185423-26-1
N-CBZ-4-乙酸-分子式:277.32分子量: C15H19NO4英文名称:N-CBZ-4- - piperidine acetateCAS号:63845-28-3
2-苄盐酸盐分子式:211.73分子量: C12H18ClN英文名称:2- benzyl piperidine hydrochlorideCAS号:
西尼罗河病毒(WNV)核酸检测试剂盒方法Rabbit Anti-mouse IgG 兔抗小鼠IgG 1mg
SRC src原癌基因抗体 0.2ml
PACAP-38 腺苷酸环化酶激活肽-38抗体 0.1ml
Smad3 细胞信号转导分子SMAD3抗体 0.1ml
phospho-JunB(Ser79) 磷酸化活化蛋白激酶B抗体 0.1ml
MICS1 生长激素诱导跨膜蛋白抗体(乳头源性蛋白2) 0.2ml
BCL2L12 BCL2样12含脯氨酸蛋白抗体 0.2ml
SV2A 突触泡蛋白2A抗体 0.2ml
C1ORF74 1号染色体开放阅读框74抗体 0.2ml
S100A11 S100钙结合蛋白A11抗体 0.1ml
ZNF217 锌指脂蛋白217抗体 0.2ml
LASS1 长寿相关基因lASS1抗体 0.2ml