人β氨基己糖苷酶A定性测定ELISA试剂盒

人β氨基己糖苷酶A定性测定ELISA试剂盒相关实验研究：

β-N-乙酰氨基己糖苷酶及其合成寡糖的研究进展
摘要：β-N-乙酰氨基己糖苷酶(EC.3.2.1.52)是一类重要的糖苷水解酶,在自然界中催化简单的β-N-乙酰氨基己糖苷或复杂的寡糖链、多糖链中末端N-乙酰己糖苷键的水解,在微生物、植物和动物中广泛分布,具有重要的生物学功能。某些种类的β-N-乙酰氨基己糖苷酶在一定的人为条件下水解β-N-乙酰氨基己糖苷键的同时还具有转糖基作用,能将β-N-乙酰氨基己糖基转移到不同的羟基化合物上,合成β-N-乙酰氨基己糖苷化合物,在糖链合成上具有应用的潜力。本文综述了β-N-乙酰氨基己糖苷酶的结构和催化机制、酶的生物学功能以及酶在β-N-乙酰氨基己糖苷化合物合成中的应用,以促进β-N-乙酰氨基己糖苷酶的进一步研究和开发应用。 
试剂盒的组成： 
（1）结合物及标本的稀释液；
（2）洗涤液，在板式ELISA中，常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水；
（3）酶标记的抗原或抗体（结合物）；
（4）酶的底物；
（5）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），elisa试剂盒参考标准品和控制血清（定量测定中）；
（6）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）
用途：科研与实验专用试剂，不得用于临床诊断。
检测种属：人、大小鼠、兔、羊、猴、猪、豚鼠ELISA检测试剂盒等种属。
标本：血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。 
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人β氨基己糖苷酶A定性测定ELISA试剂盒双抗体夹心ELISA法定量测定人血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清液和其他生物液体含量。

液体类标本：
包括血清，血浆，尿液，胸腹水，脑脊液，细胞培养上清液等。
血清：
室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，如保存过程中如有沉淀，请再次离心。
血浆：
应根据标本的要求选择EDTA，柠檬酸钠或者肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，在离心20分钟（2000-3000转/分），仔细收集上清，如保存过程中有沉淀，请再次离心。
尿液：
用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，如保存过程中有沉淀，请再次离心。
细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，当细胞浓度达到100万/ml左右，通过反复冻融，使细胞破坏并释放细胞内的成份，离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，如保存过程中有沉淀，请再次离心。
组织标本：
切割标本后，称取重量，加入一定量的PBS（PH7.4），用液氮迅速冷冻保存备用，标本融化后仍保持2-8℃的温度，加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分，离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，分装后留一份待检测，其余冷冻备用。

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ELISA试剂盒的包被条件与封闭：包被用抗原或抗体的浓度，包被的温度和时间，包被液的pH等应根据试验的特点和材料的性质而选定。抗体和蛋白质抗原一般采用pH9.6的碳酸盐缓冲液作为稀释液，也有用pH7.2的磷酸盐缓冲液及pH7~8的Tris-HCL缓冲液作为稀释液的。通常在ELISA板孔中加入包被液后，在4-8℃冰箱中放置过夜，37℃中保温2小时被认为具有同等的包被效果。包被的Z适当浓度随载体和。抗体和蛋白质抗原一般采用pH9.6的碳酸盐缓冲液作为稀释液，也有用pH7.2的磷酸盐缓冲液及pH7~8的Tris-HCL缓冲液作为稀释液的。通常在ELISA板孔中加入包被液后，在4-8℃冰箱中放置过夜，37℃中保温2小时被认为具有同等的包被效果。包被的Z适当浓度随载体和包被物的性质可有很大的变化，每批材料需通过实验与酶结合物的浓度协调选定。一般蛋白质的包被浓度为100ng/ml-20ug/ml。
封闭(blocking)是继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。抗原或抗体包被时所用的浓度较低，吸收后固相载体表面尚有未被占据的空隙，封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙，从而排斥在ELISA其后的步骤中干扰物质的再吸附。封闭的手续与包被相类似。Z常用的封闭剂是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白，也有用10%的小牛血清或1%明胶作为封闭剂的。脱脂奶粉也是一种良好的封闭剂，其Z大的特点是价廉，可以高浓度使用（5%）。高质量的速溶食用低脂奶粉即可直接当作封闭剂使用，但由于奶粉的成份复杂，而且封闭后的载体不易长期保存，因此在试剂盒的制备中较少应用。 
封闭是否必要，取决于ELISA的模式及具体的实验条件。并非所有的ELISA固相均需封闭，封闭不当反而会使阴性本底ZG。一般说来，双抗体夹心法，只要酶标记物是高活性的，操作时洗涤彻底，不经封闭也可得到满意的结果。特别是用单抗腹水直接包被时，因其中大量非抗体蛋白在包被时同样也吸附在固相表面，业已起到了类似封闭剂的作用。但在间接法测定中，封闭一般是不可少的。包被好的ELISA板干燥后放入密封袋或锡袋中，在低温可保存数月。