产品介绍 | 简介 目前酶免疫分析(EIA)技术,已被广泛应用于抗原,半抗原或抗体的定量或定性检测分析。辣根过氧化物酶(HRP)及其偶联物是酶联免疫分析技术中常用的一种酶,3,3’5,5’-四甲基联苯胺二盐酸(3,3´,5,5´tetramethylbenzidine,TMB)为过氧化物酶底物,常用作ELISA等免疫检测的显色剂。TMB被过氧化氢氧化时(由HRP催化)可形成蓝色产物,主要吸收峰在370nm和652nm。加入硫酸等酸性终止液后,变成黄色,吸收峰为450nm。TMB灵敏度很高,达到相同的检测灵敏度需要的量比ABTS少,但这也可能产生较高的背景,所以要求使用较少的蛋白或较低的抗体浓度。
保存方法: 2-8 ºC避光保存,一年有效。
显色步骤 1、加液:待样品孔中加完HRP结合物并孵育一定时间后,用适当洗涤液洗板3-5次,每孔加底物显色液A、显色液B各50ul(A、B液先混合再加入孔中),轻轻混匀,根据个人实验需要,在室温(15-25℃)或37℃下避光温育10-30分钟或更长时间,直至显色至预期深浅。 2、终止:每孔加入50ul终止液C终止反应,孔中反应液由蓝色变为黄色。 3、终止反应后15分钟内在450nm处测定各孔溶液的吸光值。 4、对照:空白对照不加HRP标记的抗体/抗原和阴性对照结果应无色。阳性对照及加HRP标记的抗体/抗原产生深蓝色产物。 5、注意:如果出现高的反应背景或沉淀,表明TMB底物反应过于强烈。为了避免产生沉淀,可在终止后马上读数;或者进一步稀释一抗和/或HRP结合物。
安全性: 1、实验用品应该专一,避免交叉污染。 2、TMB对人体有刺激性,请注意适当防护。 3、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 |