描述
ZeroBlunt®TOPO®PCR克隆试剂盒提供GX的5分钟一步克隆策略(“TOPO®克隆”),用于将校正热稳定聚合酶扩增的平端PCR产物直接插入质粒载体中。每个试剂盒都含有用于阳性选择的含有ccd B基因的ZeroBlunt®TOPO®载体(见图),仅允许具有重组体的质粒载体生长。Zero®Blunt®TOPO®试剂盒可根据您的需求和预算,提供各种感受态细胞或不含感受态细胞。Zero®Blunt®TOPO®PCR克隆试剂盒的特点:
快速简便 - 只需3个步骤即可从PCR到克隆,只需5分钟的手动操作时间 -
GX -通过正确的插入获得高达95%的克隆经过十多年的引用
证明 -可靠的性能超过4,000次引用
简单 -无需连接酶,PCR后程序或含有特定序列的PCR引物。
ZeroBlunt®TOPO®克隆试剂盒 - 概述
载体: pCR™Blunt II-TOPO®载体 - 含有ccd B基因,可直接选择重组体
克隆方法: TOPO®克隆 - 拓扑异构酶I基,5分钟钝化连接用校正热稳定聚合酶扩增的PCR产物
感受态细胞:多种选择 - 从具有通用,GX,噬菌体T1抗性,快速生长的感受态细胞的试剂盒中选择,或使用您自己的。
的pCR™钝II-TOPO®矢量设计为校正活性的聚合酶
在PCR™钝II-TOPO?载体是设计用来克隆通过热稳定的校正活性的聚合酶如产生的Platinum®平端PCR产物的Pfx DNA聚合酶。pCR™Blunt II-TOPO®载体包含:
•位于PCR产物插入位点侧翼的EcoRI位点,可轻松切除插入物
•卡那霉素和Zeocin™抗性基因可供您选择在大肠杆菌中选择
•SP6启动子/引物位点用于体外 RNA转录和测序
•用于测序或PCR筛选的M13正向和反向引物位点
pCR™Blunt II-TOPO®克隆选择
pCR TM -Blunt II-TOPO允许通过破坏致死的大肠杆菌基因ccd B 直接选择重组体。载体含有与LacZα片段的C末端融合的ccd B基因。平末端PCR产物的连接破坏了LacZα- ccd B基因融合体的表达,允许转化后仅阳性重组体的生长。含有非重组载体的细胞在接种后被杀死。因此,不需要蓝/白筛选。
简化的基于TOPO®的克隆
使用TOPO®克隆技术,不需要含有特定序列的PCR引物,PCR后程序,载体制备或其他时间密集的DNA操作步骤。只需将PCR反应直接添加到提供的拓扑异构酶电荷载体中,孵育5分钟,转化大肠杆菌感受态细胞。
GX克隆
高达95%的克隆携带所需的插入物,您可以筛选更少的克隆,节省您的时间和金钱。该试剂盒中使用的pCR™Blunt II-TOPO®载体含有致死的ccd B基因,可有效选择由热稳定校正聚合酶产生的平端PCR重组产物。
克隆的标准
在克隆方面,TOPO®克隆技术十多年来一直是数千名科学家的可靠合作伙伴。TOPO®克隆快速,简单易用且GX,已应用于许多不同的载体,适用于各种应用。
ZeroBlunt®TOPO®PCRCloning®试剂盒选项
用于将平端PCR产物直接插入质粒载体的ZeroBlunt®TOPO®PCR克隆试剂盒可与各种感受态细胞一起购买,根据您的需要提供不同的优势:
一般克隆:TOP10细胞(目录号K2800-20,K2800-40)
GX克隆:TOP10 Electrocomp™细胞(目录号K2860-01,K2860-40)
一般克隆,噬菌体T1抗性:DH5α-T1R (货号:K2820-20,K2820-40)
快速增长:Mach1™-T1R具有化学竞争力的大肠杆菌(目录号K2830-20)
提供您自己的产品:灵活性和省钱(目录号450254)
我们还提供包含PureLink的套件版本®快速质粒微量制备试剂盒(目录号K2800-02),用于分离干净,可测序的重组质粒