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一、壳聚糖纳米颗粒的制备
1、乙酸溶液的配制:取0.3mL乙酸溶于100mL无菌去离子水,配制成0.3%(v /v)乙酸溶液。
2、壳聚糖溶液的配制:取100mg壳聚糖(分子量分别为390KDa,脱乙酰程度90%,浙江玉环海洋生物公司)溶于50 mL上述乙酸溶液,配制成0.2% (w /v) 壳聚糖溶液,用0.22μm滤膜过滤。
3、多聚磷酸钠(TPP)溶液的配制:取20mg TPP溶于20mL消毒去离子水,配制成0.1%(w/v) 溶液。
4、空白壳聚糖纳米颗粒的配制:6mL TPP溶液加入15mL壳聚糖溶液,室温,磁力搅拌,自动形成乳白色悬液,用0.22μm滤器过滤。
5、GbpB-壳聚糖溶液的配制:将GbpB溶于壳聚糖溶液,以空白壳聚糖液作为对照,用核酸蛋白检测仪检测GbpB浓度。
6、GbpB-壳聚糖纳米颗粒的配制:取0.2mL TPP液加入0.5mL GbpB-壳聚糖溶液,室温,高速振荡,自动形成乳白色悬液。
二、GbpB-壳聚糖纳米颗粒物理性能的检测
1、取少量GbpB-壳聚糖纳米颗粒经透射电镜检查大小、粒径分散性、形态。
2、取少量GbpB-壳聚糖纳米颗粒,离心(10000 r/min,10 min),用空白壳聚糖纳米颗粒作空白对照,测上清中GbpB浓度,计算上清中GbpB量,用以下公式计算葡聚糖结合蛋白B(GbpB)包装容量和包装效率:
GbpB包装容量= (GbpB总量-上清中GbpB量) /(GbpB-壳聚糖纳米颗粒总量)。
GbpB包装效率= (GbpB总量-上清中GbpB量) /GbpB总量。