Amnis 量化成像分析流式细胞仪

       虽然流式技术在过去的30年中，实现了长足的发展，并早已成为生命科学研究不可或缺的研究手段。然而，其数据结果始终没能突破散点图和直方图的固定数据模式，除了圈门和计数用户无法探究数据背后的更深层次内涵，更无法将这个技术的统计学力量释放出更大的潜能。

       不同于传统流式细胞分析技术，ImageStreamX MarkII量化成像分析流式细胞仪除了可以获得基于荧光信号强度的散点图和直方图以外，还可以为高速液流中的每个细胞同步生成多达12张高清成像图片，包含明场和暗场以及多达10通道且明显优于传统流式分析技术的高灵敏度荧光数据结果。更为重要的是，ImageStreamX MarkII量化成像分析流式细胞仪不仅仅是简单的细胞成像，并可以根据多达100种以上的形态学量化参数对不同的细胞进行区分和计数。超高的检测灵敏度以及快速分析的特点充分满足稀有细胞分析的需要。

产品应用

      ImageStreamX MarkII量化成像分析流式细胞仪巧妙地将流式细胞技术在免疫表型分析方面的统计学力量以及该方法本身在细胞分析领域的高灵敏度和高速度优势同荧光显微镜技术在细胞形态学细节的洞察力和针对细胞功能研究的深度有机地结合在一起，实现了上述两项技术单独均无法突破的应用瓶颈，为流式细胞技术开启了一扇全新的应用之门。

      ImageStreamX MarkII量化成像分析流式细胞仪研发伊始就是要创造一款细胞研究的综合平台，采用和传统流式细胞仪及荧光显微镜相同的染料和生物标记物，可以实现传统流式细胞技术的全部应用，同事它还将带给您不一样的视觉验证以及前所未有的量化成像分析。

      ImageStreamX MarkII量化成像分析流式细胞仪可用于细胞形态变化、细胞自噬作用、细胞信号转导、共定位和示踪等研究场景。

细胞信号转导（独有的应用）

       细胞活性、分化及宿主防御功能受到多种过程调节，其中转录因子从细胞质到细胞核的转运过程则是一个重要的环节。利用Dimilarity形态学量化参数，通过对相关转录因子和细胞核的图像进行自动分析处理，精确量化细胞内分子的核运转程度。

实验案例：NF-κB在全血不同白细胞中的转运

选取经免疫分型检测的全血，通过60倍成像定量分析NF-kB在不同白细胞类型中的转运程度。实验结果显示，脂多糖能够特异性的诱导NF-kB在单核细胞中的核转运（直方图蓝色部分，右下图），但并不诱导T细胞中的转运过程（直方图黑色部分，右上图）。

      Amnis量化成像分析流式细胞仪具备快速采集大量细胞图像数据的能力，并结合系统中Bright Detail Similarity形态学量化参数对细胞图像进行客观的定量统计分析，极大的优化了共定位的研究。

实验案例：CpGB在原代浆样树突状细胞中的内化和转运

通过利用Internalization（Y轴）以及Bright Detail Similarity（X）轴两个参数对图像进行分析，可以量化pDC内的CpGB向溶酶体的的定向转运过程。右图显示pDC（橙色）、CpGB（红色）和溶酶体（绿色）的荧光图像。散点图的左下方所示，为结合在pDC细胞表面的CpGB。随着CpGB进入pDC， Internalization值升高（图左上方）。当CpGB转移到溶酶体，其与溶酶体之间的similaity值相应升高（图右上方）。

细胞形态研究（独有的应用）

      细胞形态的变化往往与细胞功能有密切的关系，尤其在巨噬细胞活化，干细胞分化以及细胞药物反应等方面表现更为突出。Amnis量化成像分析流式细胞仪可以应用其所标配的IDEAS专业分析软件中的预置的形态学量化参数对细胞形态进行客观的自动化评价，Cicularity数值就是众多形态学量化参数的其中之一。

Circularity数值是衡量细胞的多个半径间差异的指标。纵坐标表示circularity数值，当所测算的细胞样本如左图所示，处于圆形且较完整，其多个半径间差异相对较低，因而Circularity数值较高，而当样本如右图所示形状并不规则时，其多个半径间的差异较大，因而Circularity数值较低。

实验案例：原代单核细胞的形态学变化

纵坐标表示Circularity。与对照相比，用MCP-1处理的样品，Circularity数值明显降低，证明趋化因子MCP-1诱导单核细胞形态发生变化，并迁移到炎症部位。反之，如果通过药物处理，如自身免疫性疾病的药物，可降低炎症反应，则Circularity数值升高。

细胞自噬（独有的应用）

       细胞发生自噬时，作为标记物的细胞质LC3蛋白经过加工在自噬体外膜表面大量聚集。利用Spot Count形态学量化参数，能够直观观察LC3荧光斑点的同时，准确统计每个细胞内LC3斑点的数量，从而对细胞自噬状态进行量化分析。

ImageStreamX MarkII量化成像分析流式细胞仪中包含的IDEAS图像处理软件能够准确每个细胞中的荧光斑点数。如图所示，利用Spot Count形态学量化参数计算出不同细胞内含有的LC3-FITC数量不同。实验过程见右图。

实验案例：慢性粒白血病细胞K562的自噬

K562细胞癌抗肿瘤药物toposide作用下发生自噬。上图右侧所示为对照组和实验组中细胞的明场，（BF），LC3-FITC（绿色）和DAP（紫色）染色结果。每个样本收集超过10000个细胞，并利用IDEAS软件系统中Spot Count形态学量化参数精确定量每个细胞中的LC3斑点数。统计结果如左侧直方图所示，实验组中含有FIC-LC3荧光斑点的细胞（44%）远高于对照组（13%）。

T细胞和APC细胞间免疫突触的形成（独有的应用）

     T细胞与APC细胞表面粘附分子之间通过受体—配体相互作用得以紧密接触，形成了一个环形且周围分布着粘附分子的瞬时性结构，称为免疫突触。Amnis的可视化圈门的功能结合IDEAS软件的特殊量化参数，可以特异地找到形成了免疫突触的黏连体细胞，量化分析T细胞与APC细胞间形成的免疫突触。

实验案例：原代单核细胞的形态变化