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细胞名称:HEL92.1.7细胞|人白血病细胞(含STR鉴定)
细胞冻存方法
主要操作步骤为:
(1)选择处于对数生长期的细胞,在冻存前一天蕞好换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉,用0.25% 胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶,加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞,使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(1000r/min,10分钟)。
(2)去上清液,加入含20%小牛血清的完全培养基,于4℃预冷15分钟后,逐滴加入已无菌的DMSO或甘油,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,细胞浓度为3×106~1×107/mL之间。
(3)将上述细胞分装于安瓿或专用冷冻塑料管中,安瓿装1~1.5mL在火焰喷灯上封口,封口处要完全封闭,圆滑无勾。冷冻管要将盖子盖紧,并标记好细胞名称和冻存日期,同时作好登记(日期、细胞种类及代次、冻存支数)。
(4)将装好细胞的安瓿或冻存管装入沙布袋内;置于液氮容器颈口处存放过夜,次日转入液氮中。采用控制降温速度的方法也可采用下列步骤:先将安瓿置入4℃冰箱中2~3小时,再移至冰箱冷冻室内3~4小时(此步可省略),再吊入液氮容器颈气态部分存放2小时,蕞后沉入液氮中。
细胞冻存在液氮中可以长期保存,但为妥善起见,冻存半年后,蕞好取出一只安瓿细胞复苏培养,观察生长情况,然后再继续冻存。
HEL92.1.7细胞|人白血病细胞(含STR鉴定)
2BS 人胚肺二倍体细胞
293(HEK-293;HEK293)人胚肾细胞
293 Ad5人原胚肾转化细胞
2V6.11人胚肾细胞
BEAS-2B人正常肺上皮细胞
Caco-2人结直肠腺癌细胞
Caov-3人乳头状卵巢腺癌细胞
C918人侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞
CNLMG-B5537SKIN 人类成纤维细胞
CNLMG-B5538LC 人永生化淋巴细胞
CNLMG-B5538SKIN 人类成纤维细胞
CCC-ESF-1人胚皮肤成纤维细胞
CCC-HB-2人胚膀胱组织来源细胞
CCC-HBE-2人胚气管组织来源细胞
做细胞实验的同学看过来。原装ATCC细胞现货来啦。
选择上海素冉生物细胞有3个理由:
1、细胞状态好,形态佳,易成活,是市面上比较好养的细胞之一;
2、物流迅速,复苏好后发货,次日就能到;
3、使用我司推荐的进口品Pai血清进行培养实验,效果更佳。
专业技术人员李工收藏的细胞培养小技巧:
1. 买细胞要去靠谱的地方买,比如 ATCC 或者素冉生物。一般上面会有针对细胞的介绍,这样培养之前可以了解细胞正常生长的状态图、传代、培养基的类型等。
2. 不管是买的细胞,还是别人惠赠的细胞,刚拿到手赶紧的做两件事:检测是否有支原体污染;迅速扩增冻存,冻存细胞复苏后第二天蕞好更换一次培养基。
3. 发现细胞有污染迅速处理掉,特别是当你养了很多种细胞时。细菌污染、真菌污染很容易发现,支原体污染的话,细胞会长的慢,可以买个支原体检测的试剂盒定期检测一下。
4. 不同细胞生长周期不同。有的生长很快,比如说 MDA-MB-231,传代的时候取离心悬液的十分之一就已经足够了。有的又是特别慢,比如 BT474,传代是一分二,复苏起始的时候两周多才能长满。这就需要要在培养细胞的过程中多多摸索。
5. 对于娇弱的细胞,就得细心呵护。胰酶消化不能过久,吹得时候要轻柔,离心时候也要注意转速和时间。每天都要去看一下细胞,肉眼观察培养基状况、显微镜下观察细胞生长状况。记住,是每天。
细胞培养常见问题及解决方法
问题 | 原因 | 解决方案 |
细胞生长缓慢 | 生长培养基使用不当 | 按照生产商的建议,使用相应的预热生长培养基。 |
生长培养基中血清质量差 | 使用其他批次血清。 |
传代操作不当 | 按照生产商的建议消化时间及传代比例进行操作。 |
换液过于频繁 | 降低换液频率,参考生产商推荐的换液频率。 |
细胞传代次数过多 | 使用传代次数较少的健康细胞。 |
细胞生长超过汇合状态 | 哺乳动物细胞传代应在细胞处于对数期、未达到汇合状态时进行,建议细胞密度达 80-90%传代。 |
细胞被支原体污染 | 将细胞、培养基和试剂丢弃;新取一只冻存细胞,并且使用新的培养基和试剂。 |
细胞复苏存活率低 | 细胞冻存不当 | 新取一只冻存细胞,并储存在液氮中。将细胞储存在液氮中,直至复苏。 |
自行制备的冻存细胞无活性 | 将细胞按照生产商推荐的密度冻存。 |
制备冻存细胞时使用传代次数少的细胞。 |
严格按照生产商推荐的操作程序冻存细胞。请注意本手册推荐的冷冻程序是冻存细胞的一般流程,只能作为指导原则使用。 |
新取一只冻存细胞。 |
细胞复苏方法不当 | 严格按照生产商推荐的操作程序复苏细胞。请注意本手册推荐的解冻程序是复苏细胞的一般流程,只能作为指导原则使用。 |
确保冷冻细胞解冻迅速,接种前用预热的生长培养基缓慢稀释细胞。 |
复苏培养基使用不当 | 使用生产商推荐的培养基。确保培养基使用前已经预热。 |
细胞稀释过度 | 按照生产商的建议,将解冻后的细胞高密度接种,以改善复苏效果。 |
处理细胞时动作不够轻柔 | 冻存和复苏过程对大多数细胞都会造成不利影 响。不要通过涡旋振荡或者用力敲打培养瓶的方法使细胞脱落(培养昆虫细胞时除外),也不要高速离心细胞。 |
冻存液中所用保护剂在储存过程中未避光 | 如果未避光储存,冻存保护剂会转变为对细胞有毒性的物质;新取一只冻存保护剂,重新冻存细胞。 |
★由于细胞库现有细胞类目多,为了不出现混乱错误,需要了解相关细胞价格及详细资料直接call,对您造成的不便还请见谅!
★注:如运输过程中导致细胞污染或者死亡,我们将无条件补发
收货后十个工作日内有其他问题提供照片可半价重发
,通过低温保藏储备一些细胞,以防支原体大面积来袭。如果支原体有抬头的迹象,或常规检测呈阳性结果,那么Z可靠的补救措施是扔掉所有培养物,清洁培养箱和超净台,一切从头开始。当然,你得确保储备的细胞是不含支原体的。