U14-GFP细胞GFP标记的小鼠子宫颈癌动物细胞

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U14-GFP细胞GFP标记的小鼠子宫颈癌动物细胞

【细胞传代】：1:3 传代

【细胞活力】：90％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

【细胞检测】：细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌

【细胞冻存】：液氮冻存（基础培养基+10%DMSO+20%FBS）

【细胞运输】：干冰运输（1 Vial）或活细胞运输（T-25 flasks）

详细背景： 这株细胞的细胞骨架染色突出呈现肌动蛋白，在细胞质中有丰富的平行微丝。有报道称在1uM血管紧张素II存在下，它们会收缩。细胞在软琼脂中形成克隆，SV40大T抗原阳性。

细胞来源： 细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外大学建系

"购买细胞注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，U14-GFP细胞GFP标记的小鼠子宫颈癌动物细胞显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养过夜，隔天再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。

4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和公司技术部沟通交流。

规格： 复苏T25培养瓶(一瓶)或冻存1ml冻存管（两支）

细胞规格： 1*10(5)/ml——1*10（6）/ml

 上海素冉生物科技有限公司是一批由美国留学归来的致力于服务ZG生物领域的青年创办的一家新型公司。公司自创办以来，以优质的产品、快捷的速度和完善的售后服务，赢得生物界老师的厚爱，您选择素冉的理由： 产品齐全：囊括实验室仪器、设备、实验室耗材、免疫生物学试剂、动物生物学试剂、植物生物学试剂、微生物学试剂、细胞生物学试剂、遗传学生物试剂、生物化学试剂、分子生物学试剂。 品Pai齐全：囊括国内外100多个知名品Pai。 方便、快捷，订货周期短，选择服务质量好的快递，全称跟踪，及时到达您的手中。素冉生物努力打造生物领域内的京东商城。 平价：同等质量的产品，我们这里价格实惠，为您节省每一分钱。 优质的售后服务：实验过程，我们有技术全程跟踪指导，若有问题，我们时间为您处理，保证您售后无忧。 多姿多彩的技术服务：免疫学技术服务、Western Blotting技术服务、实时荧光定量PCR(RealTime PCR)技术服务、病理学检测技术服务等。 总之，素冉生物是您值得信赖的地方：诚实正直，以客户的切身利益为出发点，关注客户，协助客户一起成长！

小鼠细胞培养实验步骤
一般培养-保持胚细胞处于未分化状态
培养基
细胞复苏
冻存细胞
明胶包被
细胞传代
体外分化
培养基
包被有多聚鸟氨酸/纤维结合蛋白的培养板(使用或不使用盖玻片)
体外分化方法
注:以下培养针对于小鼠的R1胚胎干细胞系,其它胚胎干细胞的培养可以参考。不过人的胚胎干细胞培养不可以采用下面的protocol,需要用专用的protocol 和培养基。
一般培养--维持ES细胞处于未分化状态
ES细胞培养用含有LIF(白血病YZ因子)和Feed细胞的培养基(高糖)来阻止细胞的分化。为细胞提供包被有0.1%明胶的平板作为粘附细胞的基质。建议每2-3天从达到80%-90%融合的平板按1:8的比率传代细胞一次,细胞传代以后,在将细胞接种在0.1%明胶包被的培养皿之前,通过预先将细胞接种在没有经过包被的组织培养板2个小时,使分化细胞粘附,从而将分化和未分化细胞分开。将细胞全程置于37℃,5%CO2,湿度条件下培养。如果在Feed 细胞,那么就需要采用MMC进行处理,YZFeed细胞增殖,但仍然能保持其分泌LIF因子的活性。下文中暂不提及Feed细胞。Feed细胞可以来源于STO细胞或原代胚胎成纤维细胞。
培养基
ES:
配制一20×不含DMEM,HS,LIF的溶液(该溶液也能用于EB培养基--见下文)。分装在50ml 离心管中,(稀释为2×,每管42ml),贮存在-20℃。通过将21ml 该溶液,HS和LIF加入450ml DMEM中制备培养基,0.22 μm滤膜过滤。贮存于4℃,时间不要超过2周。
贮存液
DMEM(高糖)
马血清(HS)
L-谷氨酰胺(200mM)
MEM NEAA(10mM)
HEPES(1M)
β-巯基乙醇(55Mm)
PEST
LIF
复苏细胞
细胞被冻存在10%二甲基亚砜(DMSO)中防止结晶的形成,结晶的形成会损害细胞。然而,二甲基亚砜对细胞有毒性,快速的进行细胞复苏是很重要的。
步骤:
1.从液氮中取出一管细胞;
2.将冻存管置于37℃水浴中2分钟(或放到管内溶液恰好完全溶解);
3.将细胞转移到一15ml Falcon管中;
4.加入5ml ES培养基(用培养基冲洗冻存管);
5.离心3分钟;
6.弃上清,用2ml ES培养基重悬细胞,至少吹打10次;
7.接种在明胶包被(见下文)的6孔或6cm组织培养皿;
8.孵育。
冻存细胞
冻存液
90%HS和10%DMSO
步骤:
1.1×PBS洗细胞并留少许PBS在培养皿内;
2.用细胞刮刀收集细胞;
3.将细胞转入15ml 离心管管内并离心3分钟;
4.弃去上清并将细胞重悬于冷的冻存液中(10 cm的培养皿用2ml,15cm的培养皿用6-7ml。)
5.分装于冻存管内,每管1ml;
6.置-80℃过夜,第二天移入液氮。
Geltin(明胶)包被
准备500ml 0.1%geltin溶液
1.将0.5 g明胶溶解在500ml无钙镁的PBS中(50-65℃水浴15~30分钟)。
2.在溶液没有冷却的情况下通过0.22 μm滤膜过滤,贮存在4℃。
包被培养板或培养皿
1.加入足量的明胶溶液覆盖培养平面(15 cm培养皿加2ml,10 cm培养皿加0.5~
1 ml,溶液的量并不重要,只要能完全覆盖培养表面就行了。);
2.置室温30分钟;
3.去除明胶溶液,将培养板贮存在包装袋中室温放置,注意将板子平放或倒扣,以免明胶污染盖子和流出培养板。
细胞传代
建议每2天传代细胞一次,过度生长的细胞会降低细胞的自然分化率,我们建立了一种纯化方法来去除分化细胞,在将细胞接种在明胶包被的培养板上之前,通过将分化细胞黏附在没有包被的组织培养板上去除分化细胞。

只可用于科研，不可用于临床诊断和ZL

1.应遵守慢冻快融的原则。先将水浴锅调至37-37。5度，取出冻存的细胞迅速放入后将细胞面浸至水面以下不断摇动至融化。

2.在无菌台内将完全培养基加入50ml的小培养瓶内，约5ml左右，然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞，置培养并内轻轻摇晃，使细胞均匀后置培养箱内培养。

贴壁细胞:对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基，吸的越干净越好，以免中和后加入的消化液，使强度减弱（或PBS洗1－3次）。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml，按此比例进行消化，(根据经验)，晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟，镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后，轻轻振动瓶底使细胞全部脱落，加入2-3ml完全培养基后，轻轻吹打，使细胞基本成单个悬浮，然后分置其它无菌培养瓶内，加入完全培养基后继续培养或实验。

悬浮细胞:一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内，加入完全培养基继续培养，如要高浓度可先离心1000rpm，5min后加入完全培养基，轻轻吹匀后，分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养。

公司全部产品进入。。。

部分产品如下：

人急性单核细胞白血病单核细胞 AML-193细胞 人急性单核细胞白血病单核细胞，AML-193细胞
小鼠巨噬细胞 Ana-1细胞 小鼠巨噬细胞，Ana-1细胞
大鼠外分泌细胞 AR42J细胞 大鼠外分泌细胞，AR42J细胞
人转移腺癌细胞 AsPC-1细胞 人转移腺癌细胞，AsPC-1细胞
小鼠垂体瘤细胞 AtT-20细胞 
小鼠黑色素瘤细胞 B16细胞 小鼠黑色素瘤细胞，B16细胞
小鼠皮肤黑色素瘤细胞 B16-F10细胞 小鼠皮肤黑色素瘤细胞，B16-F10细胞
绒猴EBV转化的白细胞 B95-8细胞 绒猴EBV转化的白细胞，B95-8细胞
小鼠胚胎成纤维细胞 BALB/3T3 clone A31细胞 小鼠胚胎成纤维细胞，BALB/3T3 clone A31细胞
人乳腺癌细胞 Bcap-37细胞 人乳腺癌细胞，Bcap-37细胞
人正常肺上皮细胞 BEAS-2B 细胞 人正常肺上皮细胞，BEAS-2B 细胞
人肝癌细胞 BEL-7402细胞 人肝癌细胞，BEL-7402细胞
人肝癌细胞 BEL-7404细胞 人肝癌细胞，BEL-7404细胞
人肝癌细胞 BEL-7405细胞 人肝癌细胞，BEL-7405细胞
小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞 Beta-TC-6细胞 小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞，Beta-TC-6细胞
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仓鼠肾成纤维细胞 BHK-21 [C-13]细胞 仓鼠肾成纤维细胞，BHK-21 [C-13]细胞
小鼠胚胎肝细胞 BNL CL.2细胞 小鼠胚胎肝细胞，BNL CL.2细胞
大鼠肝细胞 BRL细胞 大鼠肝细胞，BRL细胞
大鼠肝细胞 BRL 3A细胞 大鼠肝细胞，BRL 3A细胞
人乳腺导管癌细胞 BT-474 [BT474]细胞 人乳腺导管癌细胞，BT-474 [BT474]细胞
人乳腺管癌细胞 BT-549细胞 人乳腺管癌细胞，BT-549细胞
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