大鼠嗜碱性粒细胞RBL-1 大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞RBL-1动物

产品名称：大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞RBL-1动物

• 细胞数量： 1*10^6
• 细胞种属： 大鼠源
• 生长特性： 贴壁
• 培养基： DMEM-H
• 形态特征： 成纤维细胞样
• 传代方法： 1:3传代,2-3天传一代
• 培养条件： 胎牛血清至浓度为10％。环境：空气，95％;二氧化碳（CO2），5％；温度，37℃
• 细胞描述： 亲本L的亚克隆，是建立的连续传代细胞之一，L细胞源自100天的雄性C3H/An小鼠的皮下网眼状空隙和脂肪组织。APRT+，HPRT+。
• 细胞冻存： 液氮冻存（冻存液基础培养基+20%FBS+10%DMSO）
• 细胞运输： 干冰运输（2ml冻存管）或活细胞运输（T25瓶）

大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞RBL-1动物

形态特性 上皮细胞样　 
生长特性 贴壁生长 
特征特性 CHO-HCV-C细胞整合有丙型肝炎病毒的Core基因，能稳定表达C蛋白，是HCV基础研究的极好摸型。它由武汉大学病毒学国家ZD实验室郭佳博士于2008年构建并保存。 

注意事项

冻存细胞接收后的处理：

1.干冰运输，收到细胞后立即转入-80℃冰箱短暂中转或直接复苏；
2.收到细胞后，若发现干冰已经完全挥发、冻存管瓶盖破裂脱落,请立即拍照后与我们联系。

复苏细胞接收后的处理：

1.收到细胞后，请首先检查培养瓶是否破损或漏液，培养液是否混浊，如有漏液及培养液混浊情况请立即拍照把图片发给我们。
2.75%酒精消毒瓶身后放培养箱中静置4-6h后，在显微镜下确认细胞状态并拍照100倍和200倍的照片，若有贴壁细胞脱落，可收集上清离心，将沉淀用新的培养基接种至新的培养瓶或培养皿中。
3.建议收到当天不要消化处理，如果细胞长满90%，可选择传代处理。
4.如您收到细胞3天内没有反馈相关问题，出现的细胞问题将不提供免费重发服务。

细胞培养方法：

1. 细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
   ①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
   ②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
   ③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
   ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
   ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
   ⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
   2、细胞复苏：
   ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
   ②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
   3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
   ①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
   ②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；
   ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
   ④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

"细胞培养三不要：

养科研细胞是生物医学研究的基本功。有三个小经验可以和大家分享一下：

1. 不要烧瓶口。大多数人都喜欢在酒精灯的火焰上关瓶子，觉得这样可以避免污染。不知道大家是不是有培养基怎么越用越发紫的困惑？知道为什么吗？烧瓶口烧的。培养基一般都是用碳酸/碳酸氢跟作缓冲体系。瓶口在火焰上的时候，炽热的空气进入瓶内。塞紧塞子放入冰箱后，空气变冷，压力骤降，培养基中的碳酸就会转化成二氧化碳，释放出来。培养基中的碳酸少了，当然会变碱。如果不烧瓶口的话，你会发现培养液变碱的速度会大大减慢。（当然多多少少还是会有一点越用越碱，因为室温还是比冰箱内的温度高）

其实烧瓶口防止污染纯粹是心理安慰。不妨试一下把手指在火上晃几下，你会发现根本就不会烧疼。如果有细菌的话，这么晃两下也烧不死多少。要想烧死全部细菌，除非把瓶口和塞子烧红。我在国内从来就不烧瓶口。来美国以后发现这里更彻底，超净台内根本就不点酒精灯。

2. 不要频繁看细胞。对于初学者而言，养细胞就像养孩子一样，有空就要去看看。细胞越是养不好，就越是经常去看。实际上看细胞对细胞的生长没有任何好处，特别是对原代细胞或是免疫磁珠分选后，密度特别低的细胞。培养基中的生长因子是非常有限的。细胞好不容易自分泌一点儿促生长的因子在其周围，形成有利于生长的局部环境。你跑去看细胞，培养瓶这么一晃，把因子都给晃散了。经常可以看到新手一天到晚都在看细胞，细胞老是长不好。老手细胞一扔好几天不管，细胞疯长。

3. 不要怕消化。

大鼠细胞系在传代的时候，初学者往往生怕细胞消化过度，早早地终止消化。细胞没下来就使劲吹灯，吹得满瓶子都是气泡。在我看来，用力吹打对细胞的损伤比消化更大。我师兄在做血管平滑肌原代的时候，37度消化过夜，细胞也没事。我一般是等细胞完全变圆后才中止消化。细胞轻轻一晃就能下来。还有，动作要轻柔，尽量不要产生气泡。气泡在破裂时的应力相当大，对细胞的伤害也是很大的。" 详见细胞说明书

传代方法： 建议1:2-1:3 两天换液一次

冻存条件： 详见细胞说明书

大鼠神经胶质瘤细胞 C6细胞从上一次分裂结束后到下一次分裂开始的一段时间成为分裂间期。分裂间期以细胞内部DNA合成为依据，又可分为：

1.G1期——DNA合成前期 该期是从上一次细胞周期完成后开始的，刚形成的两个子细胞，其体积较原有的细胞小。该期特点是物质代谢活跃，迅速合成RNA和蛋白质，细胞体积显著增大。这一期的主要意义在于为下阶段S期的DNA复制作好物质和能量的准备。

细胞进入G1期后，并不是毫无例外地都进入下一期继续增殖，在此时可能会出现三种不同前景的细胞：①增殖细胞：这种细胞能及时从G1期进入S期，并保持旺盛的分裂能力。例如消化道上皮细胞及细胞等； ②暂不增殖细胞或休止细胞：进入G1期后不立即转入S期，在需要时，如损伤、手术等，才进入S期继续增殖。例如肝细胞及肾小管上皮细胞等；③不增殖细胞：此种细胞进入G1期后，失去分裂能力，终身处于G1期，Z后通过分化、衰老直至死亡。例如高度分化的神经细胞、肌细胞及成熟的红细胞等。

2.S期——DNA合成期 S期主要特征是复制DNA，使DNA含量增加一倍，保证将来分裂时两个子细胞的DNA含量不变。从G1期进入S期是细胞周期的关键时刻，只要DNA的复制一开始，细胞增殖活动就会进行下去，直到分裂成两个子细胞为止。该期中，如果受到某些因素干扰，会影响到DNA的复制，而引起细胞的变异或分裂异常终止。

3.G2期——DNA合成后期 此期主要为分裂期做准备。这一期DNA合成终止，但合成少量RNA和蛋白质，可能与构成纺锤体的微管蛋白有关

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