NR8383大鼠肺泡巨噬细胞 大鼠肺泡巨噬细胞NR8383大鼠动物细胞系

产品名称：大鼠肺泡巨噬细胞NR8383大鼠动物细胞系

• 产品编号：NR8383
• 细胞数量： 1*10^6
• 细胞种属： 大鼠源
• 生长特性： 贴壁
• 培养基： DMEM-H
• 形态特征： 成纤维细胞样
• 传代方法： 1:3传代,2-3天传一代
• 培养条件： 胎牛血清至浓度为10％。环境：空气，95％;二氧化碳（CO2），5％；温度，37℃
• 细胞描述： 亲本L的亚克隆，是建立的连续传代细胞之一，L细胞源自100天的雄性C3H/An小鼠的皮下网眼状空隙和脂肪组织。APRT+，HPRT+。
• 细胞冻存： 液氮冻存（冻存液基础培养基+20%FBS+10%DMSO）
• 细胞运输： 干冰运输（2ml冻存管）或活细胞运输（T25瓶）

大鼠肺泡巨噬细胞NR8383大鼠动物细胞系

形态特性 上皮细胞样　 
生长特性 贴壁生长 
特征特性 CHO-HCV-C细胞整合有丙型肝炎病毒的Core基因，能稳定表达C蛋白，是HCV基础研究的极好摸型。它由武汉大学病毒学国家ZD实验室郭佳博士于2008年构建并保存。 
ZG仓鼠卵巢细胞（亚系克隆）；CHO-HCV-C培养条件 DMEM/F12(1:1): Ham's F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium) 10%FBS　 
传代方法 1:3传代,2-3天传一代 
传代情况 C15 
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS　 
细胞周期分为细胞间期和细胞分裂期，细胞间期较长，而细胞分裂期较短。
细胞间期是为细胞分裂的准备时期，表现为细胞增大，营养物质增多。细胞分裂期则是一个细胞由两个细胞分解为一个细胞的过程。
细胞是生命的基本单位，细胞的特殊性决定了个体的特殊性，因此，对细胞的深入研究是揭开生命奥秘、改造生命和征服疾病的关键。细胞生物学已经成为当代生物科学中发展Z快的一门学科，是生物、农学、医学、畜牧、水产和许多生物相关专业的一门必修课程。
依据细胞种类和浓度，于无菌操作台内取 10 ml培养基加至 T25或 T75 flask中。取出已解冻之细胞悬浮液，缓缓加入T25 或T75 flask 内之培养基， 混 合均匀，放入37 °C，5 % CO2 培养箱培养。

注意事项

冻存细胞接收后的处理：

1.干冰运输，收到细胞后立即转入-80℃冰箱短暂中转或直接复苏；
2.收到细胞后，若发现干冰已经完全挥发、冻存管瓶盖破裂脱落,请立即拍照后与我们联系。

复苏细胞接收后的处理：

1.收到细胞后，请首先检查培养瓶是否破损或漏液，培养液是否混浊，如有漏液及培养液混浊情况请立即拍照把图片发给我们。
2.75%酒精消毒瓶身后放培养箱中静置4-6h后，在显微镜下确认细胞状态并拍照100倍和200倍的照片，若有贴壁细胞脱落，可收集上清离心，将沉淀用新的培养基接种至新的培养瓶或培养皿中。
3.建议收到当天不要消化处理，如果细胞长满90%，可选择传代处理。
4.如您收到细胞3天内没有反馈相关问题，出现的细胞问题将不提供免费重发服务。

细胞培养方法：

1. 细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
   ①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
   ②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
   ③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
   ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
   ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
   ⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
   2、细胞复苏：
   ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
   ②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
   3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
   ①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
   ②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；
   ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
   ④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

为什么培养的细胞要及时传代？
    答：体外培养的细胞大多具有生长接触YZ的特性，也就是说当一个细胞被其他细胞包围的时候，它就会停止生长，及时传代后，细胞的生长得以继续。
2.培养液pH下降很快可能原因有哪些？其解决办法是什么？
    答：通常细胞生长得非常快时，pH值通常下降得很快。此时可以及时传代、提高传代比例或降低血清量等方法进行解决。此外，培养瓶盖拧得太紧、NaHCO3 缓冲系统缓冲能力不够、培养液中盐浓度不正确、细菌、酵母或真菌污染等也能导致pH值通常下降得很快。
       (1)按培养液中NaHCO3 浓度增加或减少培养箱内CO2 浓度，2.0g/L 到3.7g/L 浓度NaHCO3对应CO2浓度为5％到10％。
       (2)改用不依赖CO2培养液。
       (3)松开瓶盖1/4 圈。加HEPES 缓冲液至10 到25mM终浓度。
       (4)在CO2 培养环境中改用基于Earle′s 盐配制的培养液，在大气培养环境中培养改用Hanks 盐配制的培养液。
       (5)如果是污染造成的则丢弃培养物或用抗生素CJ。
3.培养液pH对细胞生长的影响？
    答：由于大多数细胞适宜pH为7.2-7.4，偏离此范围可能对细胞生长将产生有害的影响。但各种细胞对pH的要求也不完全相同，原代培养细胞一般对pH变动耐受差，无限细胞系耐受力强。但总体来说，细胞耐酸性比耐碱性强一些。在配制培养用液时，需要注意一点：培新配的培养基在经过0.10um或0.22um滤膜过滤时，溶液的pH还会向上浮动0.2左右。
NR8383大鼠肺泡巨噬细胞系

细胞编号： C5048

细胞缩写： NR8383细胞

细胞名称： NR8383(大鼠肺泡巨噬细胞系)

详细背景： NR8383来源于肺灌洗时的正常大鼠肺泡巨噬细胞。细胞在gerbil肺细胞连续培养液存在下培养了大约8-9个月。随后，不再需要外源生长因子。通过有限稀释法从单个细胞克隆并亚克隆NR8383细胞，并三次用软琼脂亚克隆。细胞表现出巨噬细胞的特性，吞噬酵母多糖和铜绿，非特异性脂酶活性，Fc受体，氧化降解；分泌IL-1, TNF beta和IL-6，可重复地响应外源生长因子。NR8383细胞响应博莱霉素，分泌TGF beta前体。在博莱霉素刺激下，TGF beta mRNA表达也上升。细胞对内毒素敏感。1-10ng/mL的LPS水平YZ增生达50%。 即使达到0.001mg/mL的水平，LPSYZ还是无毒且在后续过程中可逆的。 NR8383细胞株提供了高响应的肺泡巨噬细胞的均一来源，可以用于体外研究巨响细胞相关活性。

细胞来源： 细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外大学建系

"购买细胞注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养过夜，隔天再取出观察。NR8383大鼠肺泡巨噬细胞系此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。

4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和公司技术部沟通交流。" P4

包装规格： 复苏T25培养瓶(一瓶)或冻存1ml冻存管（两支）

细胞规格： 1*10(5)/ml——1*10（6）/ml

安全水平： 1

细胞种属： 大鼠

组织来源： 巨噬细胞

细胞形态： 巨噬细胞样

细胞特性： 贴壁和悬浮混合

细胞融合度： 95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

细胞检测： 细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌

"细胞培养三不要：

养科研细胞是生物医学研究的基本功。有三个小经验可以和大家分享一下：

1. 不要烧瓶口。大多数人都喜欢在酒精灯的火焰上关瓶子，觉得这样可以避免污染。不知道大家是不是有培养基怎么越用越发紫的困惑？知道为什么吗？烧瓶口烧的。培养基一般都是用碳酸/碳酸氢跟作缓冲体系。瓶口在火焰上的时候，炽热的空气进入瓶内。塞紧塞子放入冰箱后，空气变冷，压力骤降，培养基中的碳酸就会转化成二氧化碳，释放出来。培养基中的碳酸少了，当然会变碱。如果不烧瓶口的话，你会发现培养液变碱的速度会大大减慢。（当然多多少少还是会有一点越用越碱，因为室温还是比冰箱内的温度高）

其实烧瓶口防止污染纯粹是心理安慰。不妨试一下把手指在火上晃几下，你会发现根本就不会烧疼。如果有细菌的话，这么晃两下也烧不死多少。要想烧死全部细菌，除非把瓶口和塞子烧红。我在国内从来就不烧瓶口。来美国以后发现这里更彻底，超净台内根本就不点酒精灯。

2. 不要频繁看细胞。对于初学者而言，养细胞就像养孩子一样，有空就要去看看。细胞越是养不好，就越是经常去看。实际上看细胞对细胞的生长没有任何好处，特别是对原代细胞或是免疫磁珠分选后，密度特别低的细胞。培养基中的生长因子是非常有限的。细胞好不容易自分泌一点儿促生长的因子在其周围，形成有利于生长的局部环境。你跑去看细胞，培养瓶这么一晃，把因子都给晃散了。经常可以看到新手一天到晚都在看细胞，细胞老是长不好。老手细胞一扔好几天不管，细胞疯长。

3. 不要怕消化。

大鼠肺泡巨噬细胞系在传代的时候，初学者往往生怕细胞消化过度，早早地终止消化。细胞没下来就使劲吹灯，吹得满瓶子都是气泡。在我看来，用力吹打对细胞的损伤比消化更大。我师兄在做血管平滑肌原代的时候，37度消化过夜，细胞也没事。我一般是等细胞完全变圆后才中止消化。细胞轻轻一晃就能下来。还有，动作要轻柔，尽量不要产生气泡。气泡在破裂时的应力相当大，对细胞的伤害也是很大的。" 详见细胞说明书

传代方法： 建议1:2-1:3 两天换液一次

冻存条件： 详见细胞说明书

主要文献： 请具体查阅相关发表文章

细胞培养实验常见问题总结：
1.一般客户拿到细胞后，应该注意什么？客户收到细胞后先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞后观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养；超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。细胞消化液建议使用PBS配制，慎用Hanks液配制。
2.快递细胞多久能到，是寄冻存的细胞还是复苏好的细胞？
我们采用快递发货，一般外地2--3天，寄细胞前请确认当地温度，如果气温低于4度的，则采用邮寄冻存细胞。
3.可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。
4.可否使用与原先培养条件不同之血清种类？不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。 
5.培养基中血清的比例多少合适？血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的含量多少会对细胞的生长会产生极大的影响。血清的含量一般为5%-15%，不要低于5%或高过20%，因为含量过低会导致细胞营养不足，过高则会破坏渗透压平衡。一般建议血清含量为10%，可以适量加减。
6. 何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上的更换时间，按时更换培养基即可。还可以参照指示剂的颜色变化进行更换。
7.NR8383大鼠肺泡巨噬细胞系购买的复苏细胞，为何会有脱落？因为运输的过程中不可避免的会有震荡，收到后可以离心收集。
8.购买的细胞冷冻管经解冻后，为何会发生细胞数目太少之情形？研究人员在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少，大都是因为离心过程操作上的失误，造成细胞的物理性损伤，以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心，应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可。
9. 购买的细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因？研究人员在细胞培养时出现存活率不佳，常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–80°C太久。
10. 收到的冷冻管瓶身破裂，瓶盖有裂纹，或瓶盖脱落之原因？冷冻管瓶盖裂纹，或瓶身破裂，可能是因为操作者夹取冷冻管时用力不当，造成冷冻管裂损，建议使用止血钳小心夹取。另冷冻管瓶盖松动或松脱，乃因热胀冷缩之物理现象，冷冻管有可能因此而造成细胞污染，故冷冻管于放入和取出液氮桶时，均应立刻将冷冻管再一次扭紧。C7036 RERF-LC-AI细胞 ，公司提供背景资料、生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养全方位的技术支持，让您实验再无烦扰！

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