Q-RNA提取 Qiagen 74524 细菌总RNA稳定提取试剂盒

从细菌中稳定并纯化至多100 μg的总RNA

• 立即稳定和保护体内的RNA
• 基因表达和基因谱数据可靠
• 无需使用液氮、干冰或苯酚
• 快速获得即用型高品质总RNA
• 无需氯化铯梯度离心，无需氯化锂或乙醇沉淀

RNeasy Protect Bacteria Mini Kit包含RNAprotect Bacteria Reagent和RNeasy离心柱，前者用于稳定细菌样本中的RNA，后者使用硅胶膜技术纯化得到至多100 µg高品质RNA。可通过使用TissueLyser II实现GX破碎细菌样品。纯化过程可在QIAcube全自动核酸纯化仪上自动运行。

RNeasy Protect Bacteria Mini Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或ZL。
 

Performance

使用传统方法进行细胞收集和RNA分离时，RNA酶解会导致很多转录体的减少或丢失。这种减少在细菌mRNA分子中尤其明显，因为它们通常只有几分钟的半衰期。此外，在操作处理细菌样本过程中，一些基因会被诱导，导致部分基因的高表达。使用RNAprotect Bacteria Reagent可以在分离RNA之前迅速稳定RNA（参见"RNAprotect Bacteria Reagent prevents mRNA degradation"和"Accurate gene expression profiles"）。E. coli（6 x 108个细胞）的RNA产量是100 µg，Bacillus subtilis（1 x 108个细胞) 的RNA产量是15 µg。用此试剂盒纯化得到的RNA品质高，其A₂₆₀/A₂₈₀比值为1.9–2.1（测于10 mM Tris·Cl、pH 7.5）。

Principle

RNeasy Protect Bacteria Mini Kit提供RNA保护和分离的完整解决方案，在一个试剂盒中完成从样品收集到RNA纯化的整个过程。经验证的RNeasy硅胶膜技术与用于稳定RNA的RNAprotect Bacteria Reagent相结合，可纯化得到高品质、完整的RNA。这个过程有效地保护了样品收集过程中的细菌表达谱，确保可靠的基因表达分析结果。样本稳定后，RNeasy技术整合了异硫氰酸胍裂解的严谨性和硅胶膜纯化的纯度及速度，过程更加简洁（参见"RNeasy Mini spin column"）。

Procedure

在RNA分离前，直接向1体积的细菌培养基（≤7.5 x 108个细菌）中加入2体积的RNAprotect Bacteria Reagent，可立即稳定RNA（参见"RNAprotect Bacteria Reagent procedure"）。对样本的稳定使细菌的GX裂解有多种可选的实验方案：酶裂解、机械破碎或两种方法结合使用。我们推荐使用TissueLyser II进行GX的机械破碎。然后将乙醇加入裂解液中以提供理想的结合条件。裂解液加到RNeasy硅胶膜上（结合能力达100 µg RNA）。RNA结合到膜上后，所有污染物被GX洗去。可用30–100 µl水洗脱得到浓缩的纯RNA。RNeasy Protect Bacteria Mini Kit可在QIAcube全自动核酸纯化仪上实现自动化。

由于物种和生长状况不同可能导致从细菌中分离的RNA产量不同。RNeasy Protect Bacteria Mini Kit适用于各种细菌，包括革兰氏阳性菌（如Staphylococcus aureus和Mycobacterium avium）和革兰氏阴性菌（如Escherichia coli和Salmonella typhimurium）。生长在限制或完全培养基中的细菌均可使用。由于RNeasy操作流程能纯化大于200 nt的RNA，得到的RNA中不包含5S rRNA、tRNAs和其他低分子量RNAs。RNeasy Protect Kits提供Z高品质RNA，几乎无DNA残留。对微量DNA非常敏感的RNA应用，残留的DNA可在RNeasy操作流程中使用RNase-Free DNase Set方便地进行DNase柱上处理。

Applications

使用RNeasy Protect Bacteria Mini Kit纯化的RNA非常适用于多种应用。下游应用包括：

Northern印迹、点印迹和狭缝印迹

终点法RT-PCR

定量real-time RT-PCR

芯片分析