赖氨酸-琼脂糖凝胶 4B C6H14N2O2 现货
赖氨酸-琼脂糖凝胶4B是利用溴化氰法通过赖氨酸的α-氨基将其键合在琼脂糖凝胶上,赖氨酸上游离的ε-氨基和α-羧基可以和一系列的生物分子相互作用。主要用于纤维蛋白溶酶原、血纤维蛋白溶酶原激活剂和核蛋白体核糖核酸的分离以及双链DNA的纯化。
基质:6% 交联琼脂糖凝胶
配基: 赖氨酸
配基密度:4-7μmol/mL
颗粒大小:45-165μm
每毫升结合量:0.6mg血纤维蛋白溶酶原
流速:75cm/h
工作pH:2~11
化学稳定性:在所有的水溶性缓冲液中保持稳定;
操作温度:室温
赖氨酸-琼脂糖凝胶4B使用方法
1.装柱
(1)将所有的试剂和填料达到室温.配制初始缓冲液(平衡液)和缓冲液。
(2)根据柱子大小取所需凝胶的量,清洗掉20%乙醇,抽干,用初始缓冲液(按凝胶:缓冲液=3:1比例)配成匀浆。
(3)将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液体(液面略高于滤膜),务必使底端无气泡。
(4)用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意不要使用气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。
(5)打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过,使柱床稳定。用2-3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。
2.平衡
让平衡缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和pH不变。
3.上样
可以根据上样物质的性质选择合适pH的缓冲液,通常建议使用pH 为7.5的磷酸盐缓冲液。
4.洗脱
通常使用高2M浓度的盐溶液进行洗脱,也可以选择梯度洗脱或者温度梯度洗脱。
5.再生
再生取决于样品的性质,赖氨酸琼脂糖4 B可以用2 - 3床体积的高pH值(0.1 M Tris-HCl,0.5 M氯化钠,pH值8.5)和低pH值(0.1 M醋酸钠,0.5 M氯化钠,pH值4.5)交替洗涤再生。重复3次,缓冲液每次至少5柱床体积。
如果在分离的过程中使用了去垢剂或者变性剂,在再生的过程中也可以使用。
纯化纤溶酶原后,应该使用pH为7.5的 50 mM(含有1 M氯化钠和0.2 M ε-氨己酸)的磷酸盐再生。核酸纯化后,用至少5倍柱体积的pH为7.5的的50 mM的磷酸盐(含2 M氯化钠)清洗再生。
6.在位清洗
在一些使用的程序中,如果存在不容易洗脱的沉淀蛋白或者脂类物质,可以用
0.1%的Triton冲洗一分钟,清洗完毕后,立刻用至少5倍柱体积缓冲液平衡柱子。
赖氨酸-琼脂糖凝胶4B注意事项
(1)冻干的赖氨酸琼脂糖凝胶4B 密封贮存于8°C以下干燥的地方,溶胀的凝胶应贮存在4-8°C(保存溶液为20%乙醇),不能冷冻。
(2)在装柱、使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干,气泡进入。