伊氏锥虫PCR检测试剂盒说明书技术原理:
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。( DNA高温变性低温复性)
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
普通PCR反应流程:
需要自备的器材:
1.仪器:分析天平、离心机、荧光 PCR 扩增仪、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器(2 µL、20
µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:荧光 PCR 专用反应管、眼科剪、眼科镊、生理盐水、1.5 mL 经焦碳酸二乙酯(DEPC)水
处理的灭菌离心管、吸头(10 µL、200 µL、1000 µL)、灭菌双蒸水。
储存条件:
14℃或-20℃
准备物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀释液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
产品说明书 1份拉
产品名称 | 伊氏锥虫PCR检测试剂盒说明书 |
英文名称 | Trypanosoma evansiPCR |
编号 | HE31683-R |
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是Z末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
进口/国产英文名称:Integrin AlphaE2/CD103LIX1体
进口/国产英文名称:ENPP3/CD203c(ectonucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterase 3)凝集样氧化型低密度脂蛋白受体体
进口/国产英文名称:IQGAP1MD-1蛋白体
进口/国产英文名称:IRF-1(Interferon regulatory factor-1)MD-2蛋白体
进口/国产英文名称:IRAK 2淋巴管内皮透明质受体体
进口/国产英文名称:IL-1RA (Interleukin-1 receptor antagonist)peptide肝脏型脂肪结合蛋白体
进口/国产英文名称:Integrin a7(integrin alpha 7)荧光酶体
进口/国产英文名称:integrin Beta1(ITG- Beta1/CD29)亮肽酶3体phospho-MEK1 (Ser298)英文名称:IGFBP6化Bcl-2体
MASP英文名称:IKB epsilon化T淋巴细胞受体体
MTLR英文名称:ITGB4细胞骨架衔接蛋白BIN3体
MLT5英文名称:phospho-IL-7Ra(Tyr449)双向染色体细胞分裂蛋白1体
Matrilin 1英文名称:phospho-IRS1(Ser312)转录因子Brn3蛋白体Brn3α
MEK7英文名称:phospho-IRS-2(Ser731)骨形态发生蛋白6体
MASP2英文名称:phospho-IKK beta(Ser471)钠体
MCM2英文名称:phospho-IKK beta(Ser740)骨形态发生蛋白3体