黄热病病毒PCR检测试剂盒说明书

黄热病病毒PCR检测试剂盒说明书需要自备的器材：
1．仪器：分析天平、离心机、荧光 PCR 扩增仪、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器（2 µL、20
µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：荧光 PCR 专用反应管、眼科剪、眼科镊、生理盐水、1.5 mL 经焦碳酸二乙酯（DEPC）水
处理的灭菌离心管、吸头（10 µL、200 µL、1000 µL）、灭菌双蒸水。
普通PCR反应流程: 

储存条件：
14℃或－20℃
准备物品
清理液（A）                                   毫升
染色液（t B）                                   微升
稀释液（C）                                   毫升
溶解液（tD）                                   毫升
产品说明书                                   1份拉
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是Z末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

 肺鳞CRT(人神经胶质瘤细胞)

O-叔丁-L-苏 质量98%,BR O-tert-Butyl-L-threonine

 热带假丝酵母 Candida tropicalis戊糖杆 Lactobacillus pentosus

左旋多巴(标准品) 质量HPLC≥98%，标准品 L-dopa,Levodopa

 小鼠胰岛内皮细胞VE(人血管内皮细胞)

L-a-己二 质量>98%,BR L-a-Aminoadipic acid

 裙竹荪 Dictyophora indusiata链 Streptomyces sp.

左旋多巴 质量HPLC>97%,BR L-dopa

 人脐动脉内皮细胞完全培养褐球固 Azotobacter chrooccum

L-环 质量>98%,BR L-Cyclopropylalanine

 葡萄汁酵母 Saccharomyces uvarumBEL-7404(人肝细胞)

L-高 质量>98%,BR L-Homophenylalanine

 干酪杆 Lactobacillus casei雪白根 Rhizopus niveus

L-高脯 质量>98%,BR L-Pipecolic acid

 BEL-7405(人肝细胞)苜蓿中华根瘤 Sinorhizobium meliloti

L-正缬 质量99%,BR L-NorvalineInterferon alpha 6英文名称：Gentamicin(3G7)芳香酰胺脱酰酶样蛋白3体

CD18英文名称：GSTO1ACN9蛋白体

Inhibin beta A英文名称：GJB3双链RNA苷脱酶体（N端）

IRS-3英文名称：GNMT苷单活化蛋白激酶α2体

BAIAP2英文名称：GRP75苷激酶体

IRS1英文名称：GATA4α2巨球蛋白样蛋白1体 α2ML1

IRS-2英文名称：GABA细胞凋亡相关蛋白3体

IRS-4英文名称：GPR85肌动蛋白α/α-SMA/α Actin体
技术原理：
 DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
       在聚合酶链式反应实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。（ DNA高温变性低温复性）
       发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。