拟态弧菌PCR检测试剂盒说明书

原理是由一对引物介导，能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增，经过n个热循环扩增，扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0＜E＜1,扩增效率＝倍，使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
特异性强
PCR反应的特异性决定因素为：
①引物与模板DNA特异正确的结合；
②碱基配对原则；
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；
④靶基因的特异性与保守性。

PCR基本操作：

实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
拟态弧菌PCR检测试剂盒说明书 三叶草根瘤 Rhizobium trifolii苏木染色液

鸟呤 质量>99%,BR Guanine HCl

 SW 982(人滑膜肉瘤细胞)大鼠外周血白细胞完全培养

鸟呤 质量>98.0%，进口原装 Guanine Sulfate

 粗柄羊肚 Morchella crassipas中慢生华癸根瘤 Mesorhizobium huakuii

肌苷；次黄呤核苷 质量>98.5%,BR Inosine

 植物杆 Lactobacillus plantarum屎肠球 Enterococcus faecium

呤 质量>98%,BR Adenine hydrochloride

 人小颗粒细胞完全培养NCI-H358(人非小细胞肺细胞)

肌苷(标准品) 质量HPLC>98%,标准品 Inosine

 PANC-1, 人胰细胞杆属 Lactobacillus sp.

5‘-呤核苷二钠(AMP2Na) 质量>98%,BR 5'-AMP-Na2

 地衣芽孢杆 Bacillus licheniformis苜蓿中华根瘤 Sinorhizobium meliloti

5‘-呤核苷二钠(AMP2Na) 质量>99%,BR 5'-AMP-Na2

 大豆慢生根瘤 Bradyrhizobium japonicumNCI-H460(人肺细胞)

5--2’-脱氧尿苷(BRDU) 质量>98%,BR 5-Bromo-2-deoxyuridinephospho-IRF3 (Ser386)英文名称：Gliadin化Ack1体

ISLR2英文名称：GLIPR1L1化苷单活化蛋白激酶α1体

IQCG英文名称：GLT25D1化苷单活化蛋白激酶β1体

IQCK英文名称：GLS2化间变型淋巴瘤激酶体

Id1英文名称：GLT25D2化细血管扩张性共济失调症突变蛋白体

IMPDH1英文名称：GLT28D1化三柠檬裂解酶体

IFI78英文名称：GLT6D1化ATR体

ICAM5英文名称：GLTSCR2细胞核重定位及纺锤体检查点蛋白AMN1体
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为：
①引物与模板DNA特异正确的结合；
②碱基配对原则；
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中Z小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

需要自备的器材：
1．仪器：分析天平、离心机、荧光 PCR 扩增仪、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器（2 µL、20
µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：荧光 PCR 专用反应管、眼科剪、眼科镊、生理盐水、1.5 mL 经焦碳酸二乙酯（DEPC）水
处理的灭菌离心管、吸头（10 µL、200 µL、1000 µL）、灭菌双蒸水。
技术原理：
 DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
       在聚合酶链式反应实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。（ DNA高温变性低温复性）
       发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。
储存条件：
14℃或－20℃
准备物品
清理液（A）                                   毫升
染色液（t B）                                   微升
稀释液（C）                                   毫升
溶解液（tD）                                   毫升
产品说明书                                   1份拉
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是Z末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。
双眯标准品　CAS:　33089-61-1　Amitraz　进口、国产　　200mg

阿米替林标准品　CAS:　549-18-8　Amitriptyline Hydrochloride　进口、国产　　200mg

阿米替林相关物质A标准品　CAS:　1210-35-1　　进口、国产　　30mg

阿米替林相关物质B标准品　CAS:　1159-03-1　　进口、国产　　25mg

磺地平标准品　CAS:　111470-99-6　Amlodipine Besylate　进口、国产　　350mg

地平相关物质A标准品　CAS:　113994-41-5　　进口、国产　　25mg

季胺烯酯共聚物A型标准品　CAS:　33434-24-1　　进口、国产　　100mg

季胺烯酯共聚物B型标准品　CAS:　33434-24-1　　进口、国产　　100mg

SF126(人瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 RD(恶性胚胎横纹肌瘤)

CL-0079ES-2(人卵巢透明细胞癌细胞)5×106cells/瓶×2

IL17RC Others Human 人 IL17RC 人细胞裂解液 (阳性对照)

CNE人鼻咽癌细胞 Human nasopharyngeal carcinoma cell line CNE 1640+10%FBS

CF Protein Human 重组人 CF 蛋白 (His 标签)

小鼠小肠平滑肌细胞完全培养 100mL
鲍球状病毒PCR检测试剂盒说明书