人肝癌细胞；HB611图片

细胞名称  人肝癌细胞；HB611图片
形态特性 上皮细胞样

生长特性 贴壁生长

特征特性 向人肝癌细胞系Huh6中转入乙肝病毒HBV的基因组而建立的细胞系，可产生大量的乙肝病毒表面抗原HBsAg。

培养条件 DMEM-H：

Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS  

传代方法 1：

3传代，2-3天传1次  

传代情况 P12

冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS　

支原体检测 培养法（-）　

STR Amelogenin:X,Y；CSF1PO:10,11；D13S317:8,12；D16S539:10,11；D18S51:13,21；D21S11:29, 30；D3S1358:14,17；D5S818:8,11；D7S820:11,12；D8S1179:10.11；FGA:19,24；PentaD:9.13；PentaE:10,16；TH01:7,8；TPOX:8；vWA:14,17

同工酶

染色体

使用权限 A类

人肝癌细胞；HB611图片操作流程：

※主要试剂与仪器：倒置相差显微镜），co2孵箱。
※细胞的复苏培养传代及冻存：
  ▷细胞的复苏培养:从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,同时不断摇动使之迅速融化，然后用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液（37℃预热，8～10倍体积）离心管内,稍微吹打混匀,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内，在37℃、5％co2及饱和湿度下培养。
  ▷细胞传代:原代培养的hek－293细胞48h换液1次，细胞长至60%～70%融合时，用0.25%胰酶消化1～2min，将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散，为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次，获得细胞悬液，然后加入倍量的培养基，温和混匀，吸管分装混合液，传代扩增细胞。
  ▷细胞形态的观察:在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
  ▷生长曲线:取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液，以1×104/孔接种于24孔板，每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔，计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d，绘制细胞生长曲线
  ▷细胞的贴壁率:指数生长期的细胞，以0.25％胰酶消化成单细胞悬液，计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中，每两小时随机取出3瓶细胞，吸除培养基及未贴壁细胞，加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞，取其平均值，按照公式：贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100％，计算贴壁率。
   ▷细胞的计数:常规消化细胞，待细胞变圆、脱壁并浮起，加入少量培养基离心，再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液，用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数，按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液＝(四方格细胞数之和/4) ×104。

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