人抗单链变性DNA抗体（ssDNA）Elisa试剂盒

人抗单链变性DNA抗体(ssDNA)Elisa试剂盒（酶联免疫法）

使用说明书

规格：48次、96次

使用目的：血清、血浆及相关液体样本

标本要求
标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：

免疫吸附剂
已包被抗原或抗体的固相载体在低温（2~8℃）干燥的条件下一般可保存6个月。有些不完整的试盒，仅供应包被用抗原或抗体，检测人员需自行包被。以下简述固相载体和包被过程。

固相载体
固相载体在ELISA测定过程中作为吸附剂和容器，不参与化学反应。可作ELISA中载体的材料很多，Z常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或蛋白质抗原吸附其上后仍保留原来的免疫学活性，加之它的价格低廉，所以被普遍采用。聚苯乙烯为塑料，可制成各种形式。
ELISA载体的形状主要有三种：微量滴定板、小珠和小试管。以微量滴定板Z为常用，专用于EILSA的产品称为ELISA板，国际上标准的微量滴定板为8×12的96孔式。为便于作少量标本的检测，有制成8联孔条或12联孔条的，放入座架后，大小与标准ELISA板相同。ELISA板的特点是可以同时进行大量标本的检测，并可在特制的比色计上迅速读出结果。现在已有多种自动化仪器用于微量滴定板型的ELISA检测，包括加样、洗涤、保温、比色等步骤，对操作的标准化极为有利。聚苯乙烯经射线照射后，其吸附性能特别是对免疫球蛋白的吸附性能增加，应用于双抗体夹心法可使固相上抗体量增多，但用于间接法测抗体时空白值较大。
良好的ELISA板应该是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间、同一板各孔之间性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工艺的差别，各种产品的质量差异很大，因此，每一批号的ELISA板在使用前须事先检查其性能。
与聚苯乙烯类似的塑料是聚氯乙烯。作为ELISA固相载体，聚氯乙烯的特点为质软板薄，可剪割、价廉，但光洁度不如聚苯乙烯板，孔底亦不如聚苯乙烯平整。聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高。
为比较不同固相在某一ELISA测定中的优劣，可应用如下的试验：用其他免疫学测定方法选出一个典型的阳性标本和阴性标本，将它们进行一系列稀释后，在不同的固相载体上按预定的ELISA操作步骤进行测定，然后比较结果。在哪一种载体上阳性结果与阴性结果差别Z大这种载体就是这一ELISA测定项目的Z合适的固相载体。

人抗单链变性DNA抗体(ssDNA)Elisa试剂盒阳性对照品和阴性对照品

阳性对照品(positive control)和阴性对照品(negative control)是检验试验有效性的控
制品，同时也作为判断结果的对照，因此对照品，特别是阳性对照品的基本组成应尽量与检测标本的组成相一致。以人血清为标本的测定，对照品Z也为人血清，因为正常人血清在各种ELISA模式中可产生不同程度的本底。由于大量正常人血清较难得到，国外试剂盒中的对照品多以复钙人血浆(recalcified human plasma)为原料，即在血浆中加入钙离子，使其中的纤维蛋白质凝固，除去凝块后所得的液体，其组成与血清相似。阴性对照品须先行检测，确定其中不含待测物质。例如HBsAg检测的阴性对照品中不可含HBsAg，Z抗HBs也是阴性。阳性对照品多以含蛋白保护剂的缓冲液为基质，其中加入一定量的待检物质，此量Z在试剂说明书中标明。加入的量应与试剂的敏感度相称，在测定中得到的吸光值与受检标本吸光值比较，可对标本中受检物质的量有一个粗略的估计。国外检测HBsAg的ELISA试剂盒检测敏感度约为0.5ng/ml，阳性对照品中含量约为10ng/ml。在对照品中一般加入抗生素和防腐剂，以利保存。

参考标准品
定量测定的ELISA试剂盒应含有制作标准曲线用的参考标准品，应包括覆盖可检测范围的4-6个浓度，一般均配入含蛋白保护剂及防腐剂的缓冲液中。

人抗单链变性DNA抗体(ssDNA)Elisa试剂盒样本前处理简介

一）样本前处理的目的、内容、重要性

1、目的

样本处理的Z终目的是将待测组分从样本中分离出来，并达到能够检测的状态。

2、内容

提取、净化是主要的两个内容，也有的需要进行浓缩甚至衍生化。

3、重要性

      据统计，人们常常将60%的时间花在样品前处理上。这不但不符合GX率的要求，而且烦琐的传统样品处理方法也直接影响到Z后的分析结果。

二）残留分析的样品种类

    组织（肌肉、肝脏、鱼、虾等）、蜂蜜、蜂王浆、花粉、饲料及其原料、肠衣、熟食、尿样（猪尿、牛尿、羊尿等）、血清（牛血清、猪血清、鸡血清等）、牛奶及奶粉、鸡蛋、粪便等。

三）样本前处理操作一般步骤

1、各种溶液配制

在实验开始前按照说明书的要求配制出各种实验需要的溶液，实验室已有的的溶液也应考虑溶液的配制日期以及有效期

2、样本称量/量取前的处理

有的样本是冷冻保存，有的样本在较低温度时粘度较大在样本且变得不均一，它们称量/量取前必须解冻或加热，夏天采用放置室内解冻即可，冬天可以是防水的温水浴解冻，或24/37度温箱解冻，也可以采用暖气片解冻，但是无论是什么样的方式在解冻完成以后必须立即转到室温环境中来，以免变质，值得一提的是某些药物的实验样本的解冻方式必须使用室温解冻，其他的解冻方式均对结果都有很大的影响

3、样本称量/量取

按照说明书规定的量进行称量/量取，对于外来复核的样本称量/量取应更加的精确，当称量的量很少的情况下可由一般的天平转到分析天平去称量，天平也要按时进行校正部分样本采用量取的方式取样，在量取前必须保证量取容器的准确行；以保证样本量准确

4、样本提取液加入

按照说明书给定的量和试剂/溶液的种类加入到样本中，量少的情况下可以用移液器进行转移，当需要的试剂/溶液量较大的情况下必须用移液管。

注:需要做添加高浓度标准品的样本,在加入提取液之前加入高浓度标准品

5、震/振摇

该步骤有两种方式，一种为长时间的使用震荡器上震荡，该方法可定时定量，但对于某些实验不适用，另一种为较强烈的振荡，可用涡动仪强烈涡动，也可以人为的上下振荡。不同的实验对时间的要求也不同，要按照说明书进行

6、离心

离心有三个影响因素，即为离心力、时间、温度，需要设定的参数就是三个参数，具体的设定方式因离心机不同而有一定的差异，没有条件的情况下要保证时间和离心机转度。

7、取液

１）取上层：这是Z为常见和Z简单的取液方式，仅仅需要按量取就可以

２）取中间层：Z不常见的取液方式，一般情况下是去掉全部上层再吸取中间层，对于一些经验较为丰富的实验员在处理部分实验时可以直接突破上层取中间层

３）取下层：较4是像取中间那样进行，值得注意的是，所有取液方式都有可能遇到取液时液体的量越取越体积越大，甚至吸到移液器内，对于这样的情况在取液时注意看液体的体积达到量就不继续吸就可以了

7、吹干

吹干的三个影响因素为气体、温度、加热方式

气体：较为理想的吹干气体为氮气，出于成本问题多数小规模实验室一般采用空气吹干，

温度：根据药物与提取溶剂的物理性质选择一个合适的温度，一般在50到60℃之间

加热方式：一般有两种方式，分为水浴方式和干浴

8、复溶

吹干以后加入复溶液将药物溶解出来的过程，加速溶解的方式可为涡动溶解和超声溶解，时间时情况而定，一般仅使用涡动溶解

9、样本检测

       该步骤的具体操作见试剂盒说明书中的检测步骤。

四）前处理相关试验术语及定义

1、阴性和阳性

阴性：即样本中不含被检测物质。

阳性：样本中含有被检测物质。

2、假阴性与假阳性

假阴性：因某些因素的影响导致阳性样本检测结果为阴性的现象。

假阳性：因某些因素的影响导致阴性样本检测结果为阳性的现象。

3、灵敏度：试剂盒方法能检测到待测药物的Z底浓度。

4、准确度：指测定值(平均值)与真值的接近程度，表示分析结果的真实性。通常用添加回收率来表示：

         回收率=(测定值-空白值)/添加量 ×100％

5、精密度：指用某种方法重复测定同一均质样品测定值彼此接近程度，表示分析结果的重复性，常用变异系数表示。

6、检测限（LOD  limit of detection）：检测限指分析方法能够从样本的背景信号中检测出待测物存在时所需的Z低浓度。LOD反映了分析方法整体的灵敏度效能指标。一般对分析方法在LOD水平的定量可信性（如精密度、回收率）不作要求，一般要求残留分析方法LOD≦0.1MRL    LOD=B+2SD或B+3SD

7、定量限（LOQ  limit of quantitation）：指分析方法能够对样品中的待测物进行定量测定的Z低浓度，用于定量方法的验证。

8、残留检测限（ＭＲＬ）

规定允许食品中药物Z高残留量，很多情况下各国规定的ＭＲＬ值之间有一定的差异，多数情况下我国规定的ＭＲＬ值较日本、欧盟、美国的高一些。

人抗单链变性DNA抗体(ssDNA)Elisa试剂盒基本配套仪器

 1、微孔板酶标仪450nm/630nm

2、旋转蒸发仪/氮气吹干装置

3、均质器

4、振荡器

5、涡旋仪

6、离心机

7、天平：感量0.01g

8、微量移液器：单道 20ml～200ml、100ml～1000ml

多道 250ml

9、超声仪

10、恒温培养箱/生化培养箱

11、冰箱

12、洗板机（可选）

13、磁力搅拌器

人抗单链变性DNA抗体(ssDNA)Elisa试剂盒注意事项

1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。

2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。

3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。

4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以完全溶解。

5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。

6.用于检测的样品应保持新鲜。

7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。

8.不同批号试剂组分不得混用。

【储存及有效期】 于2～8℃避光保存，有效期为12个月