HIT抗体 人抗肝素PF4复合物抗体（HIT）Elisa试剂盒

人抗肝素PF4复合物抗体(HIT)Elisa试剂盒使用说明书  

规格 96t

目    的：人抗肝素PF4复合物抗体(HIT)Elisa试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中丙肝病毒 IgM 抗体(HCV IgM)含量。检测范围：

1.5ng/L -40ng/L
实验原理：
人抗肝素PF4复合物抗体(HIT)Elisa试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人丙肝病毒 IgM 抗体(HCV IgM)水平。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被的微孔中依次加入丙肝病毒 IgM 抗体(HCV IgM)， 再与 HRP 标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的丙肝病毒 IgM 抗体(HCV IgM)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度
（OD 值），通过标准曲线计算样品中人丙肝病毒 IgM 抗体(HCV IgM)浓度。
试剂盒组成：
Reagent    Quantity
酶标包被板    12well×8strips
标准品:80 ng/L    1×0.5ml
标准品稀释液    1×1.5ml
酶标试剂    1×6ml
样品稀释液    1×6ml
显色剂 A 液    1×6ml
显色剂 B 液    1×6ml
终止液    1×6ml
30 倍浓缩洗涤液    1×20ml×30flod
说明书    1
封板膜    2
密封袋    1

样本处理及要求：
1.血清：室温血液自然凝固    10-20    分钟，离心    20    分钟左右（2000-3000    转/分） 。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择        EDTA    或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合    10-20    分钟后， 离心 20    分钟左右（2000-3000    转/分）        。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成， 应该再次离心。
3.尿液：用无菌管收集，离心    20    分钟左右（2000-3000    转/分）    。仔细收集上清， 保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20  分钟左右（2000-3000 转/分） 。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100   万/ml   左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分） 。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的    PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持        2-8℃的温度。加入一定量的    PBS（PH7.4）    ，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心    20    分钟左右（2000-3000    转/分）    。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能  马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7.不能检测含    NaN3    的样品，因    NaN3    YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

人抗肝素PF4复合物抗体(HIT)Elisa试剂盒操作步骤：
1.标准品：其浓度为 80 ng/L(贮液)。先将其稀释为 80 ng/L(标准曲线Z高浓度)后，再准备
5 个稀释标准品的 EP  管，每个 EP  管中加入 150μL  的标准品稀释液，如图所示依次倍比稀释成 80 ng/L, 40 ng/L,20 ng/L, 10 ng/L,5 ng/L, 2.5 ng/L,，标准品稀释液(0 ng/L)直接作为空白孔。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液

Tube    0    1    2    3    4    5
ng/L    80 ng/L    40 ng/L    20 ng/L    10 ng/L    5 ng/L    2.5 ng/L

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μ l，然后再加待测样品 10 μ l（样品Z终稀释度为 5 倍） 。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁， 轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置    37℃温育    30    分钟。
4.配液：将    30    倍浓缩洗涤液用蒸馏水    30    倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置    30    秒后弃去， 如此重复    5    次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂    50μ l，空白孔除外。
7.温育：操作同    3。
8.洗涤：操作同    5。
9.显色：每孔先加入显色剂    A50μ l，再加入显色剂    B50μ l，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15    分钟.
10.终止：每孔加终止液    50μ l，终止反应（此时蓝色立转黄色）    。
11.测定：以空白空调零，450nm    波长依序测量各孔的吸光度（OD    值）    。    测定应

在加终止液后    15    分钟以内进行。

注意事项：
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡    15-30    分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间  Z控制在    5    分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线，Z做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔*孔的 OD  值） ，请先用样品稀释液稀释一定倍数（n   倍）后再测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5） 。
5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。

计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD    值为纵坐标， 在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的    OD     值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释 倍数；或用标准物的浓度与    OD        值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的    OD    值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释 倍数，即为样品的实际浓度。

人抗肝素PF4复合物抗体(HIT)Elisa试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数    R    值为    0.990    以上。
2.批内与批见应分别小于    9%和    11%
3.保存条件及有效期：
a.试剂盒保存：2-8℃。
b.有效期：6    个月