Mouse PI（Proinsulin） ELISA Kit

Mouse PI(Proinsulin) ELISA Kit小鼠胰岛素原(PI)酶联免疫吸附测定试剂盒用途

该试剂盒用于体外定量检测小鼠血清、血浆或其他相关生物液体中天然及部分重组PI浓度

Mouse PI(Proinsulin) ELISA Kit小鼠胰岛素原(PI)酶联免疫吸附测定试剂盒检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠PI抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的小鼠PI会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠PI抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠PI抗体与结合在包被抗体上的小鼠PI结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，PI浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中PI的浓度。

反应类型	夹心法
规格	96T
反应时间	4.5h
反应性	小鼠
检测方法	Colormetric
检测范围	0.16—10 ng/mL
灵敏度	0.10 ng/mL
样本体积	100μL
样本类型	血清、血浆或其他相关生物液体

特异性

可检测样本中的小鼠PI，且与其它相关蛋白无明显交叉反应。

重复性

板内，板间变异系数均<10%。

Mouse PI(Proinsulin) ELISA Kit小鼠胰岛素原(PI)酶联免疫吸附测定试剂盒典型数据

由于实验操作条件的不同（如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等），标准曲线的OD值会有所差异。以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线。

(ng/mL)	O.D	Average	Corrected
10	2.366  2.378	2.372	2.288
5	1.61  1.646	1.628	1.544
2.5	0.91  0.89	0.9	0.816
1.25	0.43  0.468	0.449	0.365
0.63	0.255  0.243	0.249	0.165
0.31	0.187  0.175	0.181	0.097
0.16	0.13  0.14	0.135	0.051
0	0.079  0.089	0.084	--

精密度

板内精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。 
板间精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。

	Intra-assay Precision			Inter-assay Precision
Sample	1	2	3	1	2	3
n	20	20	20	20	20	20
Mean (ng/mL)	0.50	0.90	3.60	0.50	0.90	3.50
Standard  deviation	0.04	0.04	0.12	0.03	0.05	0.12
C V (%)	8.00	4.44	3.33	6.00	5.56	3.43

回收率

分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白，做回收实验，得出回收率范围和平均回收率。

Sample Type	Range (%)	Average Recovery (%)
Serum (n=5)	87-99	94
EDTA plasma (n=5)	84-98	91
Cell culture media (n=5)	91-102	97

线性

分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白，做回收实验，得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍，4倍，8倍，16倍做回收实验，得出回收率范围及平均回收率。

		Serum (n=5)	EDTA plasma (n=5)	Cell culture media (n=5)
1:2	Range (%)	94-106	97-112	94-107
	Average (%)	101	104	99
1:4	Range (%)	96-109	82-95	96-110
	Average (%)	101	88	104
1:8	Range (%)	99-114	84-96	92-106
	Average (%)	105	91	100
1:16	Range (%)	98-113	80-92	96-113
	Average (%)	106	86	104

试剂盒组成及保存

未拆封的试剂盒可在4℃保存一周；如果一周以后才使用试剂盒，请拆开试剂盒按照下表中的条件分别保存各组分。

中文名称	英文名称	规格	保存条件
ELISA酶标板(可拆卸)	Micro ELISA Plate(Dismountable)	8 孔×12 条	-20℃，可存放6个月
冻干标准品	Reference Standard	2 支
浓缩生物素化抗体(100×)	Concentrated Biotinylated Detection Ab	1支 120 μL
浓缩HRP酶结合物(100×)	Concentrated HRP Conjugate	1支 120 μL	-20℃(避光)，可存放6个月
标准品&样品稀释液	Reference Standard & Sample Diluent	1瓶 20 mL	4℃.可存放6个月
生物素化抗体稀释液	Biotinylated Detection Ab Diluent	1瓶 14 mL
酶结合物稀释液	HRP Conjugate Diluent	1瓶 14 mL
浓缩洗涤液(25×)	Concentrated Wash Buffer (25×)	1瓶 30 mL
底物溶液(TMB)	Substrate Reagent	1瓶 10 mL	4℃(避光)
反应终止液	Stop Solution	1瓶 10 mL	4℃
封板覆膜	Plate Sealer	5 张
产品说明书	Product Description	1 份
质检报告	Certificate of Analysis	1 份

说明：所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染。
试剂体积以实际发货版说明书为准。相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出。

试验所需自备物品

• 1. 酶标仪(450nm波长滤光片)
• 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL
• 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水
• 4. 吸水纸

操作步骤

	1.Add 100 μL of standard or sample to each well.
	2.Remove the liquid.
	3.Add 100 μL Biotinylated Detection Ab. Incubate 1 hour at 37℃.Aspirate and wash 3 times.
	4.Add 100 μL HRP Conjugate. Incubate 30 min at 37℃.Aspirate and wash 5 times.
	5.Add 90 μL of Substrate Reagent. Incubate for 15 min at 37℃.
	6.Add 50 μL of Stop Solution.
	7.Read the OD at 450 nm immediay. Calculation of the results.