WK23055E 鸡卵黄免疫球蛋白试剂盒

鸡卵黄免疫球蛋白试剂盒
本试剂仅供研究使用试剂盒内容及其配制：

试剂盒成份	96孔配置	48孔配置
96/48人份酶标板	1块板（96T）	半块板（48T）
塑料膜板盖	1块	半块
标准品：200ng/ml	1瓶（1.0ml）	1瓶（0.5ml）
空白对照	1瓶（1.0ml）	1瓶（0.5ml）
标准品稀释缓冲液	1瓶（8.0ml）	1瓶（4.0ml）
生物素标记的抗S-100B抗体	1瓶（8.0ml）	1瓶（4.0ml）
亲和链酶素-HRP	1瓶（12ml）	1瓶（5ml）
洗涤缓冲液	1瓶（20ml）	1瓶（10ml）
底物A	1瓶（6.0ml）	1瓶（3.0ml）
底物B	1瓶（6.0ml）	1瓶（3.0ml）
终止液	1瓶（6.0ml）	1瓶（3.0ml）

自备材料：
1. 蒸馏水。
2. 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3. 振荡器及磁力搅拌器等。
4.
样品收集、处理及保存方法：
1、 血清……操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原
和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红
细胞迅速小心地分离。
2、 血浆……EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液……1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆……将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。
 5、 保存……如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
鸡卵黄免疫球蛋白试剂盒实验操作注意事项：
1、 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧或旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。
2、 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
3、 加样：加样或加试剂时，一个孔与后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间控制在10分钟内。推荐设置复孔实验。
4、 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。
5、 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除孔底残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。
6、 试剂配制：Detection Ab及HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前请手甩几下或1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、Detection Ab工作液、HRP Conjugate工作液请依据所需的量配制使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Detection Ab时，一次不要小于10μl），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、Detection Ab工作液、HRP Conjugate工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。
7、 反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。
8、 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
9、 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，使用微量振荡器(使用Z低频率)，如无微 量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。
10、 安全：试验中请穿着试验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液标 本时，请按国家生物试验室安全防护条列执行。
11、 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外）
12、 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！
安全性：
1.   避免直接接触终止液和底物A、B，一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2.   实难中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3.   不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
试剂的准备：
1.   标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：

200 ng/ml	（6号标准品）	原倍浓度不用稀释直接加入50ul
100 ng/ml	（5号标准品）	100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液
50 ng/ml	（4号标准品）	100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液
25 ng/ml	（3号标准品）	100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液
12.5 ng/ml	（2号标准品）	100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液
6.25 ng/ml	（1号标准品）	100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液
0 ng/ml	（空白对照）	原倍浓度不用稀释直接加入50ul

2.   洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。
试剂盒性能：
1.   灵敏度：Z小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2.   特异性：不与其它细胞因子反应。
3.   重复性：板内、板间变异系数均小于10%。
鸡卵黄免疫球蛋白试剂盒操作步骤：
1.   使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2.   根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
3.   加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。
4.   甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5.   每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6.   甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7.   每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育5分钟。避免光照。
8.   取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9.   在450nm波长处测定各孔的OD值。
结 果 判 断 与 分 析：
1、 仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、 以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的S-100B标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的S-100B含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度，再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
3、 检测值范围： 0-200ng/ml
4、 敏感度：1.0ng/ml