可溶性淀粉合成酶（SSS）活性检测试剂盒
注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号：BC1855
规格：100T/96S
产品内容：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：30mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存；
试剂四：粉剂×2瓶，-20℃保存；临用前加入5mL试剂一充分混匀备用；
试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10mL试剂一充分混匀备用；
试剂六：粉剂×1支，-20℃保存；临用前加入500μL双蒸水，充分溶解备用；
试剂七：液体250μL×2支，-20℃保存；
试剂八：液体12.5μL×2支；每支临用前加入溶解好的4mL试剂四。
反应液Ⅰ的配制：临用前在试剂二中加入14mL试剂一，缓慢加热，逐渐升温使其溶解，冷却后将其加入试剂三混合溶解。这样可以分两批配制并且测定。
产品说明：
SSS（EC 2.4.1.21）通常以游离态存在于质体基质中，催化淀粉链延长，主要负责支链淀粉的合成。
SSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应，将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成ADP，在反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH，NADPH生成量与前一步反应中ADP生成量呈正比，340nm下测定NADPH增加量即可计算SSS活性。
需自备的的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液制备
称取约0.1g组织加入1mL提取液，冰浴中匀浆。10000g ，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、在EP管中按顺序加入下列试剂
试剂名称（μL） | 测定管 |
样本 | 100 |
反应液Ⅰ | 135 |
混匀，30℃保温20 min，置沸水浴中1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却 |
试剂八 | 75 |
混匀，30℃保温30 min，置沸水浴中1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却，10000g 常温离心10min，取上清液（如果一次性测定样本较多，可以将试剂四、五和六按比例配成混合液）。37℃预热试剂五和上清液。 |
上清液 | 150 |
试剂五 | 100 |
试剂六 | 5 |
试剂七 | 5 |
混匀后立即取出200μL于微量石英比色皿或96孔板中，立即在340 nm波长下记录初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。
注意：试剂二如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。
三、SSS活性计算
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
1、按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
SSS（U/mg prot）=[ΔA÷（ε×d）×V测]÷(Cpr×V样÷V反总×V上清) ÷T=432×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定粗酶液蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
SSS活性（U/g 鲜重）=[ΔA÷（ε×d）×V测×109]÷(W÷V提取×V样÷V反总×V上清) ÷T=432×ΔA÷W 。
V测：测量体积，0.26m L；V样：加入样本体积，0.1m L；V反总：反应体积，0.31mL；V上清：加入上清液体积，0.15mL；V提取：加入提取液体积，1×10-3 L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×10-3mL/nmoL/cm；d：比色皿光径，1cm；T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g。
b.使用96孔板测定的计算公式如下：
1、按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
SSS活性（U/mg prot）=[ΔA÷（ε×d）×V测]÷(Cpr×V样÷V反总×V上清) ÷T =720×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
SSS活性（U/g 鲜重）=[ΔA÷（ε×d）×V测]÷(W÷V提取×V样÷V反总×V上清) ÷T=720×ΔA÷W
V测：测量体积，0.26m L；V样：加入样本体积，0.1m L；V反总：反应体积，0.31mL；V上清：加入上清液体积，0.15mL；V提取：加入提取液体积，1×10-3 L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×10-3mL/nmoL/cm；d：比色皿光径，1cm；T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g。
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运输说明：
极低温产品：极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来，再用泡沫盒密封，胶带层层粘住泡沫盒，放入索莱宝专用的箱子，然后交付给合作快递，安全快速GX放心的送至客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
低温产品：低温产品运输过程中加装索莱宝专用冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来，再使用泡沫盒密封，用胶带严实密封泡沫盒，再放入索莱宝专用的箱子（保温效果少可以持续一周），然后交付给合作快递，安全快速GX放心的送至客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
常温产品：常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。产品由公司库房人员快速配货，准确快速GX的快递保证产品快速送达您的手中。
