代做elisa实验 猪血管生成素受体/含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨酸激酶2(Tie-2)ELISA试剂盒价格 Porcine tyrosine kinase with immunoglobulin-like and EGF-like domains 2,Tie-2 ELISA kit
北京方程生物科技elisa样本处理及要求:
1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)去除颗粒。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
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ELISA试剂盒是否检测目的抗原,方法如下:
(1)将针对试剂盒特异性的重组蛋白抗原和试剂盒中的检测抗体配置成 antibody: antigen≈1:2 的混合孵育液
(2)37℃孵育 15 分钟后,代替原试剂盒中的检测抗体
(3)后续操作按照试剂盒说明书进行,加检测抗体、酶复合物和底物
(4)实验完毕后,检测其标准曲线,如果标准曲线良好则说明加入的目的抗原 和试剂盒抗体不匹配,试剂盒检测抗体针对的是非目的抗原,该试剂盒为伪劣假 造 ELISA 试剂盒。
(5)如果标准曲线无线性,则说明试剂盒检测抗体已被目的抗原中和或干扰, 影响了其实际试剂盒抗体的检测作用,则该试剂盒检测抗体针对的是目的抗原。
酶免疫测定
酶免疫测定(enzyme immunoassay)可分为均相(homogenous)和非均相
(heterogenous)两种类型。在均相EIA中可不需进行游离的和结合的标记物的分离而
直接测定标记物。例如在某种条件下,抗原抗体反应后形成的酶标记抗原抗体复合物中
的酶失去其对底物作用的活力,因而测出的酶活力直接反映游离的酶标记物。均相EIA在
临床检验中较少应用。非均相EIA需先进行游离的和结合的标记物的分离。如前所述,固
相载体可用作一种分离手段。这种固相酶免疫测定方法在1971年初建立时称为酶联免
疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay),简称ELISA,在国内有译作酶
联免疫吸附试验的,虽然含义不完全确切,但已习用。欢迎致电: 公司邮箱:bio_fc@163.com 在 线QQ:268944