KLE细胞|KLE人子宫内膜癌细胞 含STR鉴定

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产品名称：KLE细胞|KLE人子宫内膜癌细胞 含STR鉴定

·         产品编号：KLE人子宫内膜癌细胞

·         细胞数量： 1*10^6

·         细胞种属： 人源

·         生长特性： 贴壁

·         培养基： DMEM-H

·         形态特征： 成纤维细胞样

·         传代方法： 1:3传代,2-3天传一代

·         培养条件： 胎牛血清至浓度为10％。环境：空气，95％;二氧化碳（CO2），5％；温度，37℃

·         细胞描述： 亲本L的亚克隆，是建立的连续传代细胞之一，L细胞源自100天的雄性C3H/An小鼠的皮下网眼状空隙和脂肪组织。APRT+，HPRT+。

·         细胞冻存： 液氮冻存（冻存液基础培养基+20%FBS+10%DMSO）

·         细胞运输： 干冰运输（2ml冻存管）或活细胞运输（T25瓶）

KLE细胞|KLE人子宫内膜癌细胞 含STR鉴定

形态特性 上皮细胞样　 
生长特性 贴壁生长 
特征特性 CHO-HCV-C细胞整合有丙型肝炎病毒的Core基因，能稳定表达C蛋白，是HCV基础研究的极好摸型。它由武汉大学病毒学国家ZD实验室郭佳博士于2008年构建并保存。 
ZG仓鼠卵巢细胞（亚系克隆）；CHO-HCV-C培养条件 DMEM/F12(1:1): Ham's F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium) 10%FBS　 
传代方法 1:3传代,2-3天传一代 
传代情况 C15 
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS　 
细胞周期分为细胞间期和细胞分裂期，细胞间期较长，而细胞分裂期较短。
细胞间期是为细胞分裂的准备时期，表现为细胞增大，营养物质增多。细胞分裂期则是一个细胞由两个细胞分解为一个细胞的过程。
细胞是生命的基本单位，细胞的特殊性决定了个体的特殊性，因此，对细胞的深入研究是揭开生命奥秘、改造生命和征服疾病的关键。细胞生物学已经成为当代生物科学中发展Z快的一门学科，是生物、农学、医学、畜牧、水产和许多生物相关专业的一门必修课程。
依据细胞种类和浓度，于无菌操作台内取 10 ml培养基加至 T25或 T75 flask中。取出已解冻之细胞悬浮液，缓缓加入T25 或T75 flask 内之培养基， 混 合均匀，放入37 °C，5 % CO2 培养箱培养。

注意事项

冻存细胞接收后的处理：

1.干冰运输，收到细胞后立即转入-80℃冰箱短暂中转或直接复苏；
2.收到细胞后，若发现干冰已经完全挥发、冻存管瓶盖破裂脱落,请立即拍照后与我们联系。

复苏细胞接收后的处理：

1.收到细胞后，请首先检查培养瓶是否破损或漏液，培养液是否混浊，如有漏液及培养液混浊情况请立即拍照把图片发给我们。
2.75%酒精消毒瓶身后放培养箱中静置4-6h后，在显微镜下确认细胞状态并拍照100倍和200倍的照片，若有贴壁细胞脱落，可收集上清离心，将沉淀用新的培养基接种至新的培养瓶或培养皿中。
3.建议收到当天不要消化处理，如果细胞长满90%，可选择传代处理。
4.如您收到细胞3天内没有反馈相关问题，出现的细胞问题将不提供免费重发服务。

细胞培养方法：

1. 细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
   ①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
   ②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
   ③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
   ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
   ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
   ⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
   2、细胞复苏：
   ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
   ②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
   3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
   ①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
   ②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；
   ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
   ④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

2. 细胞培养具体分析：

3. 体外培养的细胞可分为原代细胞(primary culture cell)与传代细胞(subculture cell)。原代细胞是指机体取出后立即培养的细胞。有人把培养的第1代细胞与传10代以内的细胞统称为原代细胞培养，适应在体外培养下条件下持续传代培养的细胞称为传代细胞。

4. 分散的细胞悬液在培养瓶中很快(在几十分钟至数小时内)就贴附在瓶壁上，这就称为细胞贴壁。

   分散呈圆球形的细胞一经贴壁就迅速铺展并开始有丝分裂，逐渐形成致密的细胞单层，称为单层细胞(sigle layer cell),这种培养方法称为单层细胞培养。

   对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

   如果漂浮的死细胞多，说明细胞有很多老化的，建议每次传代的时候，在用胰酶消化之前，用PBS将细胞漂洗一遍，胰酶消化的时间要把握好，37℃2-3min即可，及时终止反应，否则胰酶消化过度对细胞损伤较大，也会有很多死细胞出现的;吹打细胞的动作要轻柔。

   体外培养的细胞，不论是元代细胞还是传代细胞一般不包吃体内原有的细胞形态。但大体可以分为两种基本形态：成纤维样细胞(fibroblast like cell)与上皮样细胞(epitbelial like cell)。此外还有一些可移动的游走细胞。

   某些传代细胞还可用悬浮方法培养。

   对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

   此培养条件比较复杂，悬浮培养的优点是能同时获得大量细胞。

   有什么注意事项?

   容器与反应器 可直接加热 (1)试管 主要用途：①常温或加热条件下，用作少量试剂的反应容器。②收集少量气体和气体的验纯。③盛放少量药品。使用方法及注意事项：①可直接加热，用试管夹夹住距试管口处。②试管的规格有大有小。不加热时，试管内盛放的液体不超过容积的 ，加热时不超过 。③加热前外壁应无水滴;加热后不能骤冷，以防止试管破裂。④加热时，试管口不应对着任何人。给固体加热时，试管要横放，管口略向下倾斜。⑤不能用试管加热熔融NaOH等强碱性物质。 (2)蒸发皿 主要用途：①溶液的蒸发、浓缩、结晶。 ②干燥固体物质。 使用方法及注意事项：①盛液量不超过容积的 。 ②可直接加热，受热后不能骤冷。 ③应使用坩埚钳取放蒸发皿。 (3)坩埚 主要用途：用于固体物质的高温灼烧。 使用方法及注意事项： ①把坩埚放在三脚架上的泥三角上直接加热。 ②取放坩埚时应用坩埚钳。 ③加热后可放在干燥器中或石棉网上冷却。 ④应根据加热物质的性质不同，选用不同材料的坩埚。