细胞培养经验总结
试剂分装保存
包括营养液、胰酶、血清等。
血清特别重要。血清必须贮存于 –20℃,如果一次无法用完一瓶,可将 40~50ml 分装于无菌酸处理瓶中,甚至置青霉素瓶保存。一般厂商提供的血清为无菌,不需再无菌过滤。若发现血清有许多悬浮物,则可将血清加入培养基内一起过滤,勿直接过滤血清。(一般情况下不影响细胞培养)
瓶装血清一定要逐步解冻: 4℃ 冰箱全溶后再分装,在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生。勿直接由 –20℃ 直接至 37℃ 解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
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许多生物相关研究都使用细胞,但是细胞系污染和错误鉴定一直是一个普遍存在的问题,据统计约30%细胞系被交叉污染或错误辨识。因此NIH、ATCC等权威机构强烈建议在使用培养细胞的时候进行鉴定,旨在约束因细胞交叉污染和错误辨识所导致的无效科研数据的不断扩增。目前很多杂志也越来越重视细胞株鉴定,2014年12月、2015年2月Science杂志分别发表文章ZT阐述细胞交叉污染和错误辨识的严重性,2015年4月Nature通知旗下所有杂志将要求作者鉴定论文中所用细胞系。
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冻存细胞时间为5-7个工作日,活细胞为7-15个工作日。
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(编辑:tanxi)