DNA甲基化检测

DNA甲基化是Z早发现的表观基因修饰方式之一，可能存在于所有高等生物中。甲基化的主要形式有5-甲基胞嘧啶,N6-甲基腺嘌呤和7-甲基鸟嘌呤，真核生物中的甲基化仅发生于胞嘧啶，即在DNA甲基化转移酶（DNMTs）的作用下使CpG二核苷酸5’-端的胞嘧啶转变为5’-甲基胞嘧啶。 
大量研究表明，DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而控制基因表达。DNA甲基化通常YZ基因表达，去甲基化则诱导了基因重新活化和表达。这种DNA修饰方式在不改变基因序列的前提下实现对基因表达的调控。因此基因组DNA甲基化分布的有序建立和维持对保证个体正常发育至关重要，相反，如果这套甲基化调控机制出现问题，细胞功能将发生不正常改变，可能导致细胞癌变，因此基因甲基化研究是肿瘤机制研究中的一大热点。
科佰生物提供MSP、BSP、HRM三种方法检测甲基化。

MSP:

甲基化特异性的PCR（Methylation-specific PCR，MSP）简介

用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变；随后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物进行PCR。通过电泳检测MSP扩增产物，如果用针对处理后甲基化DNA链的引物能得到扩增片段，则说明该位点存在甲基化；反之，说明被检测的位点不存在甲基化。

技术路线：

1、基因组抽提与质检；

2、亚硫氢酸盐修饰；

3、甲基化引物和非甲基化引物的设计、合成；

4、PCR扩增；

5、电泳；

6、结果分析与报告。

样品要求：

1、组织样本：-20℃或-80℃低温冰箱中保存，液氮或者干冰运输。若提供的材料为新鲜组织、血液细胞等生物材料，请提供足够提取2ug以上基因DNA的材料量；

2、DNA样本：体积≥20ul，浓度≥100ng/ul，DNA总量≥2ug，20℃保存，低温冰袋运输；

3、血液样本：要求保存于抗凝管中或冻存管中，体积大于2ml，请用干冰运送，保证DNA不降解；

4、样品为石蜡包埋组织切片的，要求提供10张组织切片光片（面积>10mm×10mm,厚度约5-10um）；

5、客户需要提供DNA样本以及需要检测的基因/CpG岛信息或者基因名称。

提交的产品和资料：

1、引物序列；

2、电泳图谱；

3、实验报告。

BSP：

亚硫酸氢盐测序法（Bisulfite sequencing PCR，BSP）简介

用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变。随后设计BSP引物进行PCR，在扩增过程中尿嘧啶全部转化为胸腺嘧啶，Z后对PCR产物进行测序就可以判断CpG位点是否发生甲基化，称为BSP-直接测序法。将PCR产物克隆至载体后进行测序，可以提高测序成功率，这种方法称为BSP-克隆测序法。

技术路线：

1、基因组抽提与质检；

2、亚硫氢酸盐修饰；

3、引物的设计、合成；

4、PCR扩增；

5、PCR产物克隆、测序；

6、结果分析与报告。

样品要求：

1、组织样本：-20℃或-80℃低温冰箱中保存，液氮或者干冰运输。若提供的材料为新鲜组织、血液细胞等生物材料，请提供足够提取2ug以上基因DNA的材料量；

2、DNA样本：体积≥20ul，浓度≥100ng/ul，DNA总量≥2ug，20℃保存，低温冰袋运输；

3、血液样本：要求保存于抗凝管中或冻存管中，体积大于2ml，请用干冰运送，保证DNA不降解；

4、样品为石蜡包埋组织切片的，要求提供10张组织切片光片（面积>10mm×10mm,厚度约5-10um）；

5、客户需要提供DNA样本以及需要检测的基因/CpG岛信息或者基因名称。

提交的产品和资料：

1、引物序列；

2、测序结果；

3、实验报告。

HRM:

高分辨率熔解曲线法（High Resolution Melt，HRM）简介

高分辨率熔解（High Resolution Melt, HRM）是一种Z新的在表观遗传学中检测 CpG 位点的一种新技术，主要是根据DNA序列的长度、GC含量、碱基互补性差异和特定饱和染料可以插入DNA双链中的特性，应用高分辨率的熔解曲线对样品进行分析，其分辨精度可以达到对单个碱基差异的区分。由于每一段DNA都有其独特的序列，因而也就有了独特的熔解曲线形状，如同DNA指纹图谱一样，具有很高的特异性、稳定性和重复性。在非CpG岛位置设计一对针对亚硫酸氢盐修饰后的DNA双链的引物，这对引物中间的片段包含感兴趣的CpG岛。若这些CpG岛发生了甲基化，用硫酸氢盐处理后，未甲基化的胞嘧啶经PCR扩增后转变成胸腺嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变，样品中的GC含量发生改变，从而导致熔解温度的变化。

技术路线：

1、基因组抽提与质检；

2、亚硫氢酸盐修饰；

3、引物的设计、合成；

4、HRM PCR扩增；

5、结果分析与报告。

样品要求：

1、组织样本：-20℃或-80℃低温冰箱中保存，液氮或者干冰运输。若提供的材料为新鲜组织、血液细胞等生物材料，请提供足够提取2ug以上基因DNA的材料量；

2、DNA样本：体积≥20ul，浓度≥100ng/ul，DNA总量≥2ug，20℃保存，低温冰袋运输；

3、血液样本：要求保存于抗凝管中或冻存管中，体积大于2ml，请用干冰运送，保证DNA不降解；

4、样品为石蜡包埋组织切片的，要求提供10张组织切片光片（面积>10mm×10mm,厚度约5-10um）；

5、客户需要提供DNA样本以及需要检测的基因/CpG岛信息或者基因名称。

提交的产品和资料：

1、引物序列；

2、HRM图谱；

3、实验报告。

价格明细：

1、试剂盒客户提供或50元/样本；

2、亚硫氢酸盐处理：100元/样本（一周）；

3、普通PCR验证引物：500元每对引物（一到两周）；

4、甲基化检测（以下三种方法选择一种或几种）；

订购方法：
1、询价及订购请填写"询价单"，并发送邮件至sales@cobioer.com
2、根据，我们会上门取样品
3、如需帮助，请发送邮件至tech@cobioer.com或，科佰生物的将竭诚为您服务。