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内参即是内部参照(Internal Control),对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins),它们在各组织和细胞中的表达相对恒定,在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。在Western Blotting 实验中,除了需要进行蛋白抽提、蛋白定量、等量蛋白上样电泳、转膜、靶蛋白抗体孵育、显色等步骤以外,还需要进行内参的检测,以校正蛋白质定量、上样过程中存在的实验误差,以保证实验结果的准确性。
实验中出现的问题及处理办法
1、为什么带出现拖尾现象?
原因:主要是样品融解效果不佳或分离胶浓度过大引起的;
处理办法:加样前离心,选择适当的样品缓冲液,加适量样品促溶剂;电泳缓冲液时间过长,重新配制;降低凝胶浓度。
2、为什么带出现纹理现象?
原因:主要是样品不溶性颗粒引起的;
处理办法:加样前离心,加适量样品促溶剂。
3、为什么电泳的条带很粗?
原因:电泳中条带很粗是常见的事,主要是未浓缩好的原因;
处理办法:适当增加浓缩胶的长度,保证浓缩胶贮液的pH正确(6.7),适当降低电压。
一. 免疫学分类:
(1)完全抗原、半抗原;
(2)胸腺依赖抗原与非依赖抗原。
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