58-58-2 嘌呤霉素 58-58-2 金克隆 厂家直销

嘌呤霉素说明书

产品名称：嘌呤霉素
别名 : 二盐酸嘌呤霉素；嘌呤霉素盐酸盐 
英文名称 : Puromycin 
CAS : 58-58-2 
分子式 : C22H29N7O5·2HCl 
分子量 : 544.44 
储存条件 : -20℃ 
危险代码 : R:22 
纯度 : ≥98%(TLC) 
外观（性状） : 白色或白中带有黄色的粉末 
单位 : 支
规格：25mg/瓶
说明：蛋白质合成YZ剂。YZ细菌、藻类原生物和哺乳动物细胞生长。
嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过YZ蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌，各种动物和昆虫细胞。某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。作用机制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。嘌呤霉素同A位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。
嘌呤霉素产生菌Streptomyces alboniger内发现的pac基因编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶（PAC），赋予机体对嘌呤霉素产生抗性。这一特性如今普遍应用于筛选特定携带pac基因质粒的哺乳动物稳定转染细胞株。
嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关，现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。在某些特定情况下，嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。
溶解性：溶于水，参考浓度50mg/ml。
使用方法
1.建议使用浓度
哺乳动物细胞：1-10 μg/mL，浓度需要杀灭曲线来确定；
大肠杆菌：LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌，使用浓度为125μg/mL。注：使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH值调节，而且受宿主细胞本身的影响。
2.溶解方法
用蒸馏水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/ml的母液，经0.22 μm滤膜过滤CJ后分装于-20℃冻存；也可溶于甲醇，配制成10 mg/ml的储存液。
3. 嘌呤霉素杀灭曲线的确定（以shRNA转染或者慢病毒转导为例）
嘌呤霉素有效筛选浓度跟细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢情况及细胞所处细胞周期位置等有关。为了筛选到稳定表达的shRNA细胞株，确定杀死未转染/转导细胞的Z低浓度嘌呤霉素至关重要。建议初次做实验的客户一定要建立适合自身实验体系的杀死曲线（kill curve）。
1） Day 1：24孔板内以5~8 x 104 cells/孔的密度铺板，铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。37℃细胞孵育过夜；
2） Day 2：a）准备筛选培养基：含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基（如0-15μg/mL，至少5个梯度）；b）往孵育过夜后的细胞内更换新鲜配制的筛选培养基；之后37℃孵育细胞；
3） Day 4：更换新鲜的筛选培养基，并观察细胞存活率。
4） 根据细胞的生长状态，约2-3天更换新鲜的筛选培养基；
5） 每日监测细胞，观察存活细胞率，从而确定抗生素筛选开始4-6天内有效杀死非转染或者所有非转导细胞的药物Z低浓度。
4. 哺乳动物稳定转染细胞株的筛选
等转染含有pac基因的质粒后，细胞在含有嘌呤霉素的培养基中增殖，以筛选出稳定转染子。
1）细胞转染48h后，将细胞（原样或稀释）置于含有适当浓度嘌呤霉素的新鲜培养基中培养。
注意：当细胞处于分裂活跃期时，抗生素作用Z明显。细胞过于密集，抗生素产生的效力会明显下降。进行细胞分盘使其密度不超过25%。
2）每隔2-3天，移除和更换含有嘌呤霉素的培养基。
3）筛选7天后评估细胞形成的病灶。病灶可能需要额外的一周或者更多时间，这依赖于宿主细胞系和转染筛选效率。注意：每日进行细胞生长状态的观察。嘌呤霉素的筛选至少需要48h，有效浓度嘌呤霉素的筛选周期一般在3-10天。
4）转移和放置5-10个抗性克隆到一个35mm的培养皿中，用选择培养基继续培养7天。此次富集培养是为日后的细胞毒性实验做准备。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）嘌呤霉素为有毒化合物，操作时请小心拿放。
   金克隆生物公司位于北京经济技术开发区，主要从事生物医药试剂的研发和生产，并兼营部分生化试剂和仪器耗材。其中我公司自主开发的分子生物学试剂、细胞培养及检测试剂、分子免疫学产品等在质量和价格方面具有较大的市场优势，欢迎广大经销商洽谈合作。金克隆生物公司位于北京经济技术开发区，主要从事生物医药试剂的研发和生产，并兼营部分生化试剂和仪器耗材。其中我公司自主开发的分子生物学试剂、细胞培养及检测试剂、分子免疫学产品等在质量和价格方面具有较大的市场优势，欢迎广大经销商洽谈合作。
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