实验注意事项:
1)RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;
2)客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号;
3)客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4)样本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
PCR基本操作:
产品名称 | 英文名称 | 分类 |
马杜拉放线菌PCR检测试剂盒说明书 | Actinomadura maduraePCR | PCR检测试剂盒 |
实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类,探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加,非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量(包括定量和相对定量)和定性分析。
主要服务:DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术:引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中Z小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
阿奇相关物质H标准品 CAS: 进口、国产 15mg
阿奇相关物质F标准品 CAS: 进口、国产 25mg
阿奇标准品 CAS: 117772-70-0 Azithromycin 进口、国产 100mg
阿奇标准品(定性用) CAS: 83905-01-5 Azithromycin Identity 进口、国产 75mg
阿奇德糖胺标准品 CAS: Desosaminylazithromycin 进口、国产 15mg
n-去阿奇标准品 CAS: N-Demethylazithromycin 进口、国产 15mg
阿奇-N-氧化物标准品 CAS: 90503-56-3 Azithromycin N-Oxide 进口、国产 15mg
偶氮-鲁米特标准品 CAS: Azo-aminoglutethimide 进口、国产 100mg
U14(小鼠子细胞) 5×106cells/瓶×2 HPAC(人胰癌细胞)
CM-M007小鼠支气管上皮细胞完全培养100mL
RETN Others Mouse 小鼠 Resistin / ADSF / RETN 人细胞裂解液 (阳性对照)
Ishikawa人子宫内膜癌细胞 Human endomeial carcinoma cells Ishikawa RPMI-1640+10%FBS
IL12A & IL12B Protein Mouse 重组小鼠 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白
小鼠肾足突细胞完全培养 100mL488-81-3高端化学试G原3(GAGE3)检测试盒(酶免疫吸附试验法)
488-81-3高端化学试组(Php)检测试盒(酶免疫吸附试验法)
488-81-3高端化学试Rabconnectin 3蛋白(RC3)检测试盒(酶免疫吸附试验法)
59122-55-3高端化学试接触蛋白6(CNTN6)检测试盒(酶免疫吸附试验法)
59122-55-3高端化学试接触蛋白5(CNTN5)检测试盒(酶免疫吸附试验法)
69227-93-6高端化学试封闭蛋白19(CLDN19)检测试盒(酶免疫吸附试验法)
69227-93-6高端化学试Codanin 1蛋白(CDAN1)检测试盒(酶免疫吸附试验法)
126787-65-3高端化学试钙结合蛋白3(CALB3)检测试盒(酶免疫吸附试验法)
487-60-5高端化学试含钙通道Flower域蛋白(CACFD1)检测试盒(酶免疫吸附试验法)
35804-66-1高端化学试耦合因子6(CF6)检测试盒(酶免疫吸附试验法)
马杜拉放线菌PCR检测试剂盒说明书原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。