基因工程人鼠嵌合抗体制备
基因工程抗体的出现,极大地推动了抗体技术的发展和抗体药物及诊断试剂的研发。我们成功建立了人鼠嵌合抗体及人源全长抗体改造系统。我们的基因工程人鼠嵌合抗体制备系统包括基因克隆,载体构建,表达筛选、抗体制备及亲和力测定等一整套嵌合(全长)抗体制备程序。
依靠我们先进的技术平台和专业的技术人员,可以将您的鼠源单克隆抗体进行人源嵌合化改造,或将您的小分子抗体进行全长改造,利用DNA重组技术将鼠单抗的轻、重链可变区基因插入含有人抗体恒定区的表达载体中,转化哺乳动物细胞表达出人鼠嵌合抗体,其人源化程度达到70%左右,完整地保留了异源单抗的可变区,Z大限度地保持了其亲和活性,降低了免疫原性。
技术路线:
1、通过质谱法/RT-PCR/RAC等方法对可变区的进行序列分析,获得重轻链可变区基因序列
2、通过基因合成/RACE/RT-PCR等技术手段,获得重轻链的可变区DNA序列,并将可变区DNA序列亚克隆至含有人抗体恒定区的表达载体上,通过酶切、测序等验证手段,验证质粒构建的准确性
3、制备去内毒素质粒,瞬时转染二氢叶酸还原酶(dhfr)缺陷型CHO细胞系,纯化少量抗体,检测其特异性及亲和力指数SPR
4、 经客户确认,建立稳转体系,加压筛选获得稳定表达的细胞株
5、 优化表达条件,加压筛选表达效率Z高的的细胞株,获得基因工程抗体表达细胞株,建立稳定细胞系