核酸稀释液,测 OD 专用100mL规格注意:
1.如果反应体系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或减少。
2.如果 DNA 模板中有 PCR 不明YZ物(植物、土壤和血液等 DNA 样品常含此类 YZ物),可以在 PCR 体系中加入 1/10 的 PCR YZ物清除剂(CAT#:60804, 30uL 体系中加 3uL),可能会对 PCR 有帮助。
PCR 反应的影响因素
核酸稀释液,测 OD 专用100mL规格变性温度与时间:
模板变性温度是决定 PCR 反应中双链 DNA 解链的温度,达不到变 性温度就不会产生单链 DNA 模板,PCR 也就不会启动。变性温度低则变性不完全, DNA 双链会很快复性,因而减少产量。变性温度太高,又会影响酶的活性。一般情况 下可设为 94℃ 20~30 秒,高温时间应尽量缩短,以保持耐热 DNA 聚合酶的活力, Z高变性温度不宜超过 95℃。 退火温度与时间:退火温度决定 PCR 特异性与产量。温度高特异性强,但过高则引物 不能与模板牢固结合.
DNA 扩增效率下降;
温度低产量高,但过低可造成引物与模板 错配,非特异性产物增加。合适的退火温度一般在 45~68℃之间。设置特定反应的Z 适退火温度,可根据引物的(G+C)%含量进行推测,一般实验中退火温度比扩增引 物的熔解温度 Tm 低 5℃,退火时间一般为 30~60 秒,足以使引物与模板之间完全结 合,长时间退火没有必要。
延伸温度与时间:
PCR 反应的延伸温度一般选择在 70~75℃之间,延伸时间根据所用 聚合酶扩增速度和扩增片段大小设定,如同样扩增 2 Kb 片段,若使用 Taq 酶只需 1 分钟,使用 Pfu 酶则应设定 2 分钟以上。延伸时间过长会导致非特异性扩增带的出现, 时间太短则可能得不到扩增产物或得到一些短的非特异性片段。
循环次数:
可根据模板 DNA 的量、扩增片段的大小和扩增产物的下步应用等因素,设 定 20-40 个循环。循环次数太少,扩增量不足,如果循环次数太多,错配几率会增加, 非特异性背景严重。所以,在保证产物得率的前提下,应尽量减少循环次数。
酶量:
50 μL 反应体系可用 0.5-5 U 酶,酶量的选择与模板 DNA 的量,扩增片段大 小等有关,酶量过多易发生非特异性反应,而且可能增加突变的机率,尤其在进行高 保真扩增时,应尽量减少酶量,但酶量过少时反应性能下降。
产品及特点:
易错 PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校对功能的特性,在一定条件下(如不同的 dNTP 浓度、Mg 浓度和 MnCl2存在)能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法,则可从构建的突变库选出所需突变体。易错 PCR 和常规 PCR 的比较如下:本产品就是专门为广大的研究工作者进行易错 PCR 而开发,本产品具有下列特点:
1. 即开即用,十分简单方便,尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。
2. 配方经过精心优化,突变率稳定,突变没有趋向性。易错 PCR 的突变率为 0.66% (±0.13%),详见使用手册疑难解答。
3. 比体内基因突变更快捷简单,但如果在 PCR 引物中设计位点,则可使产物克隆到表达载体,也可以用于体内蛋白活性的筛选。
4. 可用于连续易错 PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易错 PCR 的产物用作下一次易错 PCR 的模板即可,使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
5. 只适用于扩增 1kb 以下的产物,对于 1kb 以上的产物,建议分段扩增。
介绍:
使用方法:
1. 以 30 uL 的标准 PCR 反应体系为例,如果反应体系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或减少。在一干净的 PCR 管中,加入下列成分:易错 PCR Mix, 10× 3 uL 易错 PCR 专用 dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自备 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自备,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 补水到 30 uL
2. 按已经优化的 PCR 条件进行一定循环数的 PCR(循环数与突变率的关系见下表),然后取 5 uL 电泳检查。如果没有优化的 PCR 条件,一般可以先尝试下面的 PCR 条件: PCR 前变性 94℃ 3 分钟易错 PCR 94℃ 1 分钟 45℃ 1 分钟 循环 30 次(见注) 72℃ 1 分钟注:易错 PCR 一般不需要热启动,也不需要在 PCR 结束后做延伸处理。
3. 电泳检测是否得到预计长度的 PCR 产物。
艾氏腹水瘤瘤株;Ehrlich
人虹状体上皮细胞 (HIPEpiC)( 5×105 )
CM-M035小鼠肝动脉平滑肌细胞完全培养基100mL
小鼠胚胎成纤维细胞;C3H 10T1/2 2A6 小鼠腮腺细胞完全培养基 100mL
小鼠海马神经胶质细胞(EGFP标记) Mouse
FOLR1 Others Human 人 FOLR1 / Folate receptor alpha 人细胞裂解 (阳性对照) (变性)
小鼠间充质干细胞(EGFP标记) Mouse
CM-M121小鼠角膜内皮细胞完全培养基100mL
成人心房成纤维细胞 (HCFaa)( 5×105 )
野生型人c-kit受体细胞株;A7d 小鼠肺动脉成纤维细胞完全培养基 100mL
杂交瘤(B类);Z172A4C4C6F3G12
CD300C Others Human 人 CD300C / CMRF-35 / IGSF16 人细胞裂解 (阳性对照) (变性)
DDC Others Human 人 DOPA Decarboxylase / DDC 杆状病毒-昆虫细胞裂解 (阳性对照) (变性)
CL-0112HMy2.CIR(人B淋巴母细胞)5×106cells/瓶×2
人细胞裂解物HHDPCL
EB-3[EB3]细胞,人淋巴样Burkitt淋巴瘤细胞 人肾透明细胞腺癌细胞,786-O细胞 前脂肪细胞Many types of cells包装:5 × 105次方(1ml)
兔间变表皮鳞癌瘤株;VX2
SPINT2 Others Mouse 小鼠 SPINT2 / HAI2 人细胞裂解 (阳性对照) (变性)
CL-0112HMy2.CIR(人B淋巴母细胞)5×106cells/瓶×2
DDC Others Human 人 DOPA Decarboxylase / DDC 杆状病毒-昆虫细胞裂解 (阳性对照) (变性)
人细胞裂解物HHDPCL
EB-3[EB3]细胞,人淋巴样Burkitt淋巴瘤细胞 人肾透明细胞腺癌细胞,786-O细胞 前脂肪细胞Many types of cells包装:5 × 105次方(1ml)
兔间变表皮鳞癌瘤株;VX2
SPINT2 Others Mouse 小鼠 SPINT2 / HAI2 人细胞裂解 (阳性对照) (变性)
M-Broth
BG11Medium
改良Giolitti-Cantobi 肉汤 Modified Giolitti-Cantoni Broth 250 用于金黄色葡萄球菌的增菌培养
22体培养基250g/瓶用于海生细菌的增菌培养incubationmedia22体培养基250g/瓶用于海生细菌的增菌培养
SalmonellaShigellaAgar
一次性卫生用品检验检验培养基
改良Y培养基 Agar Y,Modified 用于分离小肠结肠炎耶尔森氏菌
抗生素7号培养基 Antibiotic Agar NO.7 250克 噻圬钠等的效价测定
SD-39琼脂250用于滤膜法大肠杆菌0离培养(NEOGEN方法)incubationmediaSD-39琼脂250用于滤膜法大肠杆菌0离培养(NEOGEN方法)
Enterotoxintoxin-producingmedium
ATCC培养基:2693改良Dixon(mDixon)250g用于真菌培养
25L incubation media 25L
梨形霉 产淀粉酶 支/瓶
煌绿乳糖胆盐肉汤BGLB(含小倒管)20支/包用于大肠菌、大肠杆菌的测定
CandidaChromogenicMedium
核酸稀释液,测 OD 专用100mL规格YeastExtractPeptone
Preston肉汤基础 250(g) incubation media Preston肉汤基础 250(g)
大肠杆菌O157显色培养基配套平皿 O157 Chromogenic Medium Dish 9㎝/块
APT琼脂250用于乳酸菌分离培养incubationmediaAPT琼脂250用于乳酸菌分离培养
四环素检定、厌氧亚盐还原杆菌、嗜热菌芽孢检验培养基