单酶一管式 RT-PCR 试剂盒 （Tth）50 次实验步骤

单酶一管式 RT-PCR 试剂盒 (Tth)50 次实验步骤注意：
1．如果反应体系不是 30 uL，各成分需要等按比例增加或减少。
2．如果 DNA 模板中有 PCR 不明YZ物（植物、土壤和血液等 DNA 样品常含此类 YZ物），可以在 PCR 体系中加入 1/10 的 PCR YZ物清除剂（CAT#：60804， 30uL 体系中加 3uL），可能会对 PCR 有帮助。
PCR 反应的影响因素
单酶一管式 RT-PCR 试剂盒 (Tth)50 次实验步骤变性温度与时间：
模板变性温度是决定 PCR 反应中双链 DNA 解链的温度，达不到变 性温度就不会产生单链 DNA 模板，PCR 也就不会启动。变性温度低则变性不完全， DNA 双链会很快复性，因而减少产量。变性温度太高，又会影响酶的活性。一般情况 下可设为 94℃ 20~30 秒，高温时间应尽量缩短，以保持耐热 DNA 聚合酶的活力， Z高变性温度不宜超过 95℃。 退火温度与时间：退火温度决定 PCR 特异性与产量。温度高特异性强，但过高则引物 不能与模板牢固结合.
DNA 扩增效率下降；
温度低产量高，但过低可造成引物与模板 错配，非特异性产物增加。合适的退火温度一般在 45~68℃之间。设置特定反应的Z 适退火温度，可根据引物的（G+C）%含量进行推测，一般实验中退火温度比扩增引 物的熔解温度 Tm 低 5℃，退火时间一般为 30~60 秒，足以使引物与模板之间完全结 合，长时间退火没有必要。
延伸温度与时间：
PCR 反应的延伸温度一般选择在 70~75℃之间，延伸时间根据所用 聚合酶扩增速度和扩增片段大小设定，如同样扩增 2 Kb 片段，若使用 Taq 酶只需 1 分钟，使用 Pfu 酶则应设定 2 分钟以上。延伸时间过长会导致非特异性扩增带的出现， 时间太短则可能得不到扩增产物或得到一些短的非特异性片段。
循环次数：
可根据模板 DNA 的量、扩增片段的大小和扩增产物的下步应用等因素，设 定 20-40 个循环。循环次数太少，扩增量不足，如果循环次数太多，错配几率会增加， 非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数。
酶量：
50 μL 反应体系可用 0.5-5 U 酶，酶量的选择与模板 DNA 的量，扩增片段大 小等有关，酶量过多易发生非特异性反应，而且可能增加突变的机率，尤其在进行高 保真扩增时，应尽量减少酶量，但酶量过少时反应性能下降。

单酶一管式 RT-PCR 试剂盒 (Tth)50 次实验步骤产品及特点：
易错 PCR（error-prone PCR）是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校对功能的特性，在一定条件下（如不同的 dNTP 浓度、Mg 浓度和 MnCl2存在）能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法，则可从构建的突变库选出所需突变体。易错 PCR 和常规 PCR 的比较如下：本产品就是专门为广大的研究工作者进行易错 PCR 而开发，本产品具有下列特点：
1. 即开即用，十分简单方便，尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。
2. 配方经过精心优化，突变率稳定，突变没有趋向性。易错 PCR 的突变率为 0.66% （±0.13%），详见使用手册疑难解答。
3. 比体内基因突变更快捷简单，但如果在 PCR 引物中设计位点，则可使产物克隆到表达载体，也可以用于体内蛋白活性的筛选。
4. 可用于连续易错 PCR（sequential error-prone PCR），只需把上一次易错 PCR 的产物用作下一次易错 PCR 的模板即可，使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
5. 只适用于扩增 1kb 以下的产物，对于 1kb 以上的产物，建议分段扩增。 

使用方法：
1. 以 30 uL 的标准 PCR 反应体系为例，如果反应体系不是 30 uL，各成分需要等按比例增加或减少。在一干净的 PCR 管中，加入下列成分：易错 PCR Mix, 10× 3 uL 易错 PCR 专用 dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自备 DNA 模板（10ng/uL） 1 uL PCR 引物(自备，10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶（5U/uL） 1 -5 U 补水到 30 uL
2. 按已经优化的 PCR 条件进行一定循环数的 PCR（循环数与突变率的关系见下表），然后取 5 uL 电泳检查。如果没有优化的 PCR 条件，一般可以先尝试下面的 PCR 条件： PCR 前变性 94℃ 3 分钟易错 PCR 94℃ 1 分钟 45℃ 1 分钟 循环 30 次（见注） 72℃ 1 分钟注：易错 PCR 一般不需要热启动，也不需要在 PCR 结束后做延伸处理。
3. 电泳检测是否得到预计长度的 PCR 产物。

K562/Adr 人白血病耐药株

CL-0107HGC-27(人胃癌细胞)5×106cells/瓶×2

12. 骨骼细胞系统

小鼠胚胎成纤维细胞;3T3-Swiss albino 大鼠角膜上皮细胞完全培养基 100mL

豹猫肺成纤维样细胞;LCL4

IL10 Others Human 人 IL10 / Interleukin-10 人细胞裂解 (阳性对照) (变性)

大鼠垂体瘤细胞;GH3

人脉络丝成纤维细胞 (HCPF)( 5×105 )

肠平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105次方(1ml)

人色素瘤细胞;A875 大鼠肠上皮细胞完全培养基 100mL

DH82 狗肾恶性组织细胞增生症细胞

CD19 Others Human 人 CD19 / Leu-12 人细胞裂解 (阳性对照) (变性)

IL17RC Others Human 人 IL17RC 人细胞裂解 (阳性对照) (变性)

CL-0079ES-2(人卵巢透明细胞癌细胞)5×106cells/瓶×2

小鼠小肠平滑肌细胞完全培养基 100mL

CNE人鼻咽癌细胞 Human nasopharyngeal carcinoma cell line CNE 1640+10%FBS

CNTF Protein Human 重组人 CNTF 蛋白 (His 标签)

SF126(人脑瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 RD(恶性胚胎横纹肌瘤)

CL-0079ES-2(人卵巢透明细胞癌细胞)5×106cells/瓶×2

IL17RC Others Human 人 IL17RC 人细胞裂解 (阳性对照) (变性)

小鼠小肠平滑肌细胞完全培养基 100mL

CNE人鼻咽癌细胞 Human nasopharyngeal carcinoma cell line CNE 1640+10%FBS

CNTF Protein Human 重组人 CNTF 蛋白 (His 标签)

SF126(人脑瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 RD(恶性胚胎横纹肌瘤)

LysineIronAgar

CompleteAgarMedium

煌绿琼脂 Brilliant Green Agar 250 用于沙门氏菌的分离培养(Acumedia方法)

磷酸盐缓冲液(pH7.2)250g/瓶用于样品稀释(GB、SN)incubationmedia磷酸盐缓冲液(pH7.2)250g/瓶用于样品稀释(GB、SN)

TSA培养基平板(9cm) 10个/包 用于环境、器皿、设备和表面的无菌检测

胰蛋白胨大豆肉汤培养基2405g可广泛应用于细菌的培养，特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡...

紫色麦康凯肉汤 (麦康凯肉汤 (US 配方)) (CM0005a) Oxoid incubation media 紫色麦康凯肉汤 (麦康凯肉汤 (US 配方)) (CM0005a) Oxoid

松生拟层孔菌 生产核苷磷酸激酶 支/瓶

A250g用于检测水中的大肠菌(US-EPA标准)

XLD培养基 250g 选择性培养基，用于志贺氏菌的选择性培养

改良CCD琼脂配套试剂SR0320每支添加于(0222成MLST

2111 KM-d 角质细胞培养基(特定) 500 ml incubation media 2111 KM-d 角质细胞培养基(特定) 500 ml

紫色小单孢菌(绛红小单孢菌) 支/瓶

胆汁液态培养基250g用于粪链球菌的胆汁耐受试验。

改良Cary-Blair氏运送培养基(不含琼脂) 250g 用于运送肠道致病菌。

单酶一管式 RT-PCR 试剂盒 (Tth)50 次实验步骤TSA胰蛋白胨大豆琼脂培养基(大豆消化酪素琼脂培养基)28072250g用于普通的或营养要求较高的细菌的培养，还用于医药工业洁净室无菌程度的监测及消毒剂消毒效果的...

Wilkins-Chalgren Anaerobe Broth/Wilkins Chalgren 厌氧肉汤 Oxoid 500G incubation media Wilkins-Chalgren Anaerobe Broth/Wilkins Chalgren 厌氧肉汤 Oxoid 500G

凸圆灵芝(白芝) 用于白酒生产 支/瓶

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