ROX 参考染料 II100μL实验步骤

PCR 反应的影响因素
ROX 参考染料 II100μL实验步骤变性温度与时间：
模板变性温度是决定 PCR 反应中双链 DNA 解链的温度，达不到变 性温度就不会产生单链 DNA 模板，PCR 也就不会启动。变性温度低则变性不完全， DNA 双链会很快复性，因而减少产量。变性温度太高，又会影响酶的活性。一般情况 下可设为 94℃ 20~30 秒，高温时间应尽量缩短，以保持耐热 DNA 聚合酶的活力， Z高变性温度不宜超过 95℃。 退火温度与时间：退火温度决定 PCR 特异性与产量。温度高特异性强，但过高则引物 不能与模板牢固结合.
DNA 扩增效率下降；
温度低产量高，但过低可造成引物与模板 错配，非特异性产物增加。合适的退火温度一般在 45~68℃之间。设置特定反应的Z 适退火温度，可根据引物的（G+C）%含量进行推测，一般实验中退火温度比扩增引 物的熔解温度 Tm 低 5℃，退火时间一般为 30~60 秒，足以使引物与模板之间完全结 合，长时间退火没有必要。
延伸温度与时间：
PCR 反应的延伸温度一般选择在 70~75℃之间，延伸时间根据所用 聚合酶扩增速度和扩增片段大小设定，如同样扩增 2 Kb 片段，若使用 Taq 酶只需 1 分钟，使用 Pfu 酶则应设定 2 分钟以上。延伸时间过长会导致非特异性扩增带的出现， 时间太短则可能得不到扩增产物或得到一些短的非特异性片段。
循环次数：
可根据模板 DNA 的量、扩增片段的大小和扩增产物的下步应用等因素，设 定 20-40 个循环。循环次数太少，扩增量不足，如果循环次数太多，错配几率会增加， 非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数。
酶量：
50 μL 反应体系可用 0.5-5 U 酶，酶量的选择与模板 DNA 的量，扩增片段大 小等有关，酶量过多易发生非特异性反应，而且可能增加突变的机率，尤其在进行高 保真扩增时，应尽量减少酶量，但酶量过少时反应性能下降。

ROX 参考染料 II100μL实验步骤产品及特点：
易错 PCR（error-prone PCR）是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校对功能的特性，在一定条件下（如不同的 dNTP 浓度、Mg 浓度和 MnCl2存在）能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法，则可从构建的突变库选出所需突变体。易错 PCR 和常规 PCR 的比较如下：本产品就是专门为广大的研究工作者进行易错 PCR 而开发，本产品具有下列特点：
1. 即开即用，十分简单方便，尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。
2. 配方经过精心优化，突变率稳定，突变没有趋向性。易错 PCR 的突变率为 0.66% （±0.13%），详见使用手册疑难解答。
3. 比体内基因突变更快捷简单，但如果在 PCR 引物中设计位点，则可使产物克隆到表达载体，也可以用于体内蛋白活性的筛选。
4. 可用于连续易错 PCR（sequential error-prone PCR），只需把上一次易错 PCR 的产物用作下一次易错 PCR 的模板即可，使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
5. 只适用于扩增 1kb 以下的产物，对于 1kb 以上的产物，建议分段扩增。 
ROX 参考染料 II100μL实验步骤介绍：

ROX 参考染料 II100μL实验步骤注意：
1．如果反应体系不是 30 uL，各成分需要等按比例增加或减少。
2．如果 DNA 模板中有 PCR 不明YZ物（植物、土壤和血液等 DNA 样品常含此类 YZ物），可以在 PCR 体系中加入 1/10 的 PCR YZ物清除剂（CAT#：60804， 30uL 体系中加 3uL），可能会对 PCR 有帮助。使用方法：
1. 以 30 uL 的标准 PCR 反应体系为例，如果反应体系不是 30 uL，各成分需要等按比例增加或减少。在一干净的 PCR 管中，加入下列成分：易错 PCR Mix, 10× 3 uL 易错 PCR 专用 dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自备 DNA 模板（10ng/uL） 1 uL PCR 引物(自备，10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶（5U/uL） 1 -5 U 补水到 30 uL
2. 按已经优化的 PCR 条件进行一定循环数的 PCR（循环数与突变率的关系见下表），然后取 5 uL 电泳检查。如果没有优化的 PCR 条件，一般可以先尝试下面的 PCR 条件： PCR 前变性 94℃ 3 分钟易错 PCR 94℃ 1 分钟 45℃ 1 分钟 循环 30 次（见注） 72℃ 1 分钟注：易错 PCR 一般不需要热启动，也不需要在 PCR 结束后做延伸处理。
3. 电泳检测是否得到预计长度的 PCR 产物。

NG108-15 大鼠小鼠杂合神经胶质瘤细胞

CL-0235TSCCa(人舌鳞癌细胞)5×106cells/瓶×2

人骨骼肌星形细胞(HSkMSC)(5×105)

人急性T淋巴细胞性白血病细胞;I 2.1(CRL-2572) 大鼠脑膜细胞完全培养基 100mL

非洲绿猴肾细胞系/HCV-C;Vero-HCV-C

COL2A1 Others Human 人 COL2A1 (aa 1242-1487) 人细胞裂解 (阳性对照) (变性)

人癌细胞;MCF7

人脐静脉内皮细胞(HVVEC)( 5×105 )

CM-H096人关节软骨细胞完全培养基100mL

转PYTL基因小鼠支持细胞;15P-1 小鼠结肠平滑肌细胞完全培养基 100mL

RN-s, 大鼠纹状体神经元 Rattus

EPHB4 Others Mouse 小鼠 EPHB4 / HTK 人细胞裂解 (阳性对照) (变性)

CSAG1 Others Human 人 CSAGE / CSAG1 人细胞裂解 (阳性对照) (变性)

CL-0047C6(大鼠胶质瘤细胞)5×106cells/瓶×2

小鼠肠血管细胞完全培养基 100mL

293LVT人胚肾细胞--用于慢病毒包装 293LVT human embryonic kidney cells -- for lentiviral packaging DMEM(GIBCO:11995)+10% FBS(GIBCO)+1%NEAA+200mM L-glutamine

IL10 Protein Feline 重组猫 IL10 / Interleukin-10 蛋白

SK-CO-1(人结直肠腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2 LoVo(人结肠癌细胞)

CL-0047C6(大鼠胶质瘤细胞)5×106cells/瓶×2

CSAG1 Others Human 人 CSAGE / CSAG1 人细胞裂解 (阳性对照) (变性)

小鼠肠血管细胞完全培养基 100mL

293LVT人胚肾细胞--用于慢病毒包装 293LVT human embryonic kidney cells -- for lentiviral packaging DMEM(GIBCO:11995)+10% FBS(GIBCO)+1%NEAA+200mM L-glutamine

IL10 Protein Feline 重组猫 IL10 / Interleukin-10 蛋白

SK-CO-1(人结直肠腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2 LoVo(人结肠癌细胞)

HydrogenSulfideIndoleMotilityMedium

TryptoseSoyaAgar

李斯特氏菌显色培养基 Listera Chromogenic Medium 1000ml 用于李斯特氏菌的显色培养

李斯特氏菌显色培养基l/瓶用于李斯特氏菌快速检测，48h内出结果，李斯特氏菌显蓝色有不透明晕环incubationmedia李斯特氏菌显色培养基l/瓶用于李斯特氏菌快速检测，48h内出结果，李斯特氏菌显蓝色有不透明晕环

含225ml生理盐水均质袋 10个/包 用于样品稀释处理

胰酪胨大豆肉汤(TSB)250g用于药品或生物制品中总需氧菌计数

葡萄球菌选择性琼脂 250(g) incubation media 葡萄球菌选择性琼脂 250(g)

色氨酸肉汤发酵管 色氨酸肉汤发酵管 20支 BR

营养琼脂(NA)250细菌总数测定，细菌传代培养incubationmedia营养琼脂(NA)250细菌总数测定，细菌传代培养

FBPSolution

改良CCD琼脂配套试剂SR0320每支添加于(0222成MLST

1621-prf OM-prf 少突胶质细胞培养基 500 ml incubation media 1621-prf OM-prf 少突胶质细胞培养基 500 ml

NutrientAgar

PSAgar

布氏菌选择性培养基 250g 用于布氏菌的选择性分离培养

ROX 参考染料 II100μL实验步骤快速硫化氢试验琼脂250g用于弯曲杆菌的硫化氢试验(GB标准)

水稻赤霉菌培养基 250g 用于水稻中赤霉菌培养

胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂(TSA-YE) Trypticase Soy-Yeast Extract Agar 250 用于单增李氏菌的分纯，培养，可用于做7%羊血琼脂(SN标准)

7.5%钠肉汤250g/瓶用于金黄色葡萄球菌的均质增菌incubationmedia7.5%钠肉汤250g/瓶用于金黄色葡萄球菌的均质增菌

MEMmaintenanceoffluid