DNA Shuffling 试剂盒10 次供应

PCR 反应的影响因素
DNA Shuffling 试剂盒10 次供应变性温度与时间：
模板变性温度是决定 PCR 反应中双链 DNA 解链的温度，达不到变 性温度就不会产生单链 DNA 模板，PCR 也就不会启动。变性温度低则变性不完全， DNA 双链会很快复性，因而减少产量。变性温度太高，又会影响酶的活性。一般情况 下可设为 94℃ 20~30 秒，高温时间应尽量缩短，以保持耐热 DNA 聚合酶的活力， Z高变性温度不宜超过 95℃。 退火温度与时间：退火温度决定 PCR 特异性与产量。温度高特异性强，但过高则引物 不能与模板牢固结合.
DNA 扩增效率下降；
温度低产量高，但过低可造成引物与模板 错配，非特异性产物增加。合适的退火温度一般在 45~68℃之间。设置特定反应的Z 适退火温度，可根据引物的（G+C）%含量进行推测，一般实验中退火温度比扩增引 物的熔解温度 Tm 低 5℃，退火时间一般为 30~60 秒，足以使引物与模板之间完全结 合，长时间退火没有必要。
延伸温度与时间：
PCR 反应的延伸温度一般选择在 70~75℃之间，延伸时间根据所用 聚合酶扩增速度和扩增片段大小设定，如同样扩增 2 Kb 片段，若使用 Taq 酶只需 1 分钟，使用 Pfu 酶则应设定 2 分钟以上。延伸时间过长会导致非特异性扩增带的出现， 时间太短则可能得不到扩增产物或得到一些短的非特异性片段。
循环次数：
可根据模板 DNA 的量、扩增片段的大小和扩增产物的下步应用等因素，设 定 20-40 个循环。循环次数太少，扩增量不足，如果循环次数太多，错配几率会增加， 非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数。
酶量：
50 μL 反应体系可用 0.5-5 U 酶，酶量的选择与模板 DNA 的量，扩增片段大 小等有关，酶量过多易发生非特异性反应，而且可能增加突变的机率，尤其在进行高 保真扩增时，应尽量减少酶量，但酶量过少时反应性能下降。

DNA Shuffling 试剂盒10 次供应产品及特点：
易错 PCR（error-prone PCR）是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校对功能的特性，在一定条件下（如不同的 dNTP 浓度、Mg 浓度和 MnCl2存在）能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法，则可从构建的突变库选出所需突变体。易错 PCR 和常规 PCR 的比较如下：本产品就是专门为广大的研究工作者进行易错 PCR 而开发，本产品具有下列特点：
1. 即开即用，十分简单方便，尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。
2. 配方经过精心优化，突变率稳定，突变没有趋向性。易错 PCR 的突变率为 0.66% （±0.13%），详见使用手册疑难解答。
3. 比体内基因突变更快捷简单，但如果在 PCR 引物中设计位点，则可使产物克隆到表达载体，也可以用于体内蛋白活性的筛选。
4. 可用于连续易错 PCR（sequential error-prone PCR），只需把上一次易错 PCR 的产物用作下一次易错 PCR 的模板即可，使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
5. 只适用于扩增 1kb 以下的产物，对于 1kb 以上的产物，建议分段扩增。 
DNA Shuffling 试剂盒10 次供应介绍：

DNA Shuffling 试剂盒10 次供应注意：
1．如果反应体系不是 30 uL，各成分需要等按比例增加或减少。
2．如果 DNA 模板中有 PCR 不明YZ物（植物、土壤和血液等 DNA 样品常含此类 YZ物），可以在 PCR 体系中加入 1/10 的 PCR YZ物清除剂（CAT#：60804， 30uL 体系中加 3uL），可能会对 PCR 有帮助。使用方法：
1. 以 30 uL 的标准 PCR 反应体系为例，如果反应体系不是 30 uL，各成分需要等按比例增加或减少。在一干净的 PCR 管中，加入下列成分：易错 PCR Mix, 10× 3 uL 易错 PCR 专用 dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自备 DNA 模板（10ng/uL） 1 uL PCR 引物(自备，10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶（5U/uL） 1 -5 U 补水到 30 uL
2. 按已经优化的 PCR 条件进行一定循环数的 PCR（循环数与突变率的关系见下表），然后取 5 uL 电泳检查。如果没有优化的 PCR 条件，一般可以先尝试下面的 PCR 条件： PCR 前变性 94℃ 3 分钟易错 PCR 94℃ 1 分钟 45℃ 1 分钟 循环 30 次（见注） 72℃ 1 分钟注：易错 PCR 一般不需要热启动，也不需要在 PCR 结束后做延伸处理。
3. 电泳检测是否得到预计长度的 PCR 产物。

Hepa 1-6 小鼠肝癌细胞

CL-0317AML-193(人急性单核细胞白血病单核细胞)5×106cells/瓶×2

人肺动脉成纤维细胞 (HPAF)( 5×105 )

人胃癌细胞;MGC-803 大鼠胎儿表皮角质形成层细胞完全培养基 100mL

人羊膜细胞;WISH

RSV-G Others Respiratory syncytial virus/RSV 人类呼吸道合胞病毒 hRSV (B1) glycoprotein G / RSV-G 人细胞裂解 (阳性对照) (变性)

615小鼠癌瘤株;Ca761

人神经系统周边细胞 (HPNC)( 5×105 )

T24, 人膀胱癌细胞

人前列腺癌细胞;PC-3 [PC3] 大鼠卵巢成纤维细胞完全培养基 100mL

Hepa 1-6 小鼠肝癌细胞

CXADR Others Mouse 小鼠 CXADR 人细胞裂解 (阳性对照) (变性)

TGFB1 Others Human 人 / 恒河猴 / 狗 TGF-beta 1 / TGFB1 CHO细胞裂解 (阳性对照) (变性)

CL-0026ARPE-19(人视网膜上皮细胞)5×106cells/瓶×2

胎牛血清FBS

黄牛皮肤细胞;BTA-S2 鼠巨噬细胞，Ana-1细胞 MOLT-4(急性淋巴母细胞白血病细胞)

EB病毒转化的人B淋巴细胞;KM9402

OMD Others Mouse 小鼠 OMD / Osteomodulin 人细胞裂解 (阳性对照) (变性)

CL-0026ARPE-19(人视网膜上皮细胞)5×106cells/瓶×2

TGFB1 Others Human 人 / 恒河猴 / 狗 TGF-beta 1 / TGFB1 CHO细胞裂解 (阳性对照) (变性)

胎牛血清FBS

黄牛皮肤细胞;BTA-S2 鼠巨噬细胞，Ana-1细胞 MOLT-4(急性淋巴母细胞白血病细胞)

EB病毒转化的人B淋巴细胞;KM9402

OMD Others Mouse 小鼠 OMD / Osteomodulin 人细胞裂解 (阳性对照) (变性)

AmmoniumDextroseMedium

葡萄糖天门冬素培养基 250g 葡萄糖天门冬素培养基

霉菌和酵母菌显色培养基 Mould and Yeast Chromogenic Medium 1000ml 用于霉菌和酵母菌的显色培养

细菌总数显色培养基2000ml/瓶用于细菌总数测定，24h内出结果，细菌呈红色incubationmedia细菌总数显色培养基2000ml/瓶用于细菌总数测定，24h内出结果，细菌呈红色

布氏肉汤添加剂(2ml/支) 2ml/支*5 添加于HBJ014中

吲哚培养基(蛋白胨水)化培养基，用于细菌靛基质试验，亦称色酸肉汤(SN标准)

固体培养基 250g 用于细菌、纤维分解菌、真菌计数培养

桔汁琼脂 ORANGE SERUM AGAR 250 用于饮料中耐酸细菌的分离培养(ACUMEDIA方法)

5000ml/瓶incubationmedia5000ml/瓶

0.1%PeptoneWater

哆醇Y培养基250g用于通过微生物学方法检测哆醇含量

15050-057 500ml incubation media 15050-057 500ml

华根霉 支/瓶

亚铋琼脂平板(9cm)用于沙门氏菌的选择性分离

YeastExtractGlucoseOxytetracyclineAgar

DNA Shuffling 试剂盒10 次供应煌绿琼脂250g用于沙门氏菌的分离培养

脆弱拟杆菌活化培养基肉汤 250g 用于脆弱拟杆菌活化培养

快速硫化氢试验琼脂 H2S Test Medium 250 用于弯曲杆菌的硫化氢试验(GB标准)

5000ml/瓶incubationmedia5000ml/瓶

FuchsinBasicSodiumSulfiteAgar