EcoR I-Not I-BamH I 接头1nmol供应

EcoR I-Not I-BamH I 接头1nmol供应规格及成分：

EcoR I-Not I-BamH I 接头1nmol供应产品及特点：

本产品是采用特殊工艺处理得到的大肠杆菌 DH10 Bac 感受态细胞，适用于昆虫杆状病毒 Bac-to-Bac 系统中同源重组的菌株，用于产生重组 Bacmid。使用 pUC19 质粒检测，本产品转化效率可达 107CFU/μg。 DH10Bac 细胞包含亲本 Bacmid bMON14272 和辅助质粒 pMON7124。亲本 Bacmid 包含一个 mini-F 复制子、卡那霉素抗性基因、att Tn7 位点和 lac Zα-互补因子。辅助质粒包含 tns ABCD 区域，该区域提供了 mini-Tn7 从供体质粒插入亲本 Bacmid 靶位点所需要的转座蛋白。供体如 pFastBac 系列质粒（pFastBac1，pFastBacDual 等）含有 Tn7R 和 Tn7L 同源重组臂，Tn7R 和 Tn7L 之间包含庆大霉素抗性基因、昆虫病毒多角体基因启动子、多克隆位点和 SV40 病毒的 PolyA 加尾信号。当含有靶基因 pFastBac 的重组质粒转化到 DH10Bac 细胞后，发生重组后就可产生重组 Bacmid，提取纯化重组 Bacmid 转染昆虫细胞 Sf9 或 Sf21 就可以包装产生昆虫病毒。此外，DH10Bac 细胞中的 The φ80dlacZDM15 基因的产物可以实现β-半乳糖苷酶的α-互补现象，用于重组 bacmid 的蓝白斑筛选。菌株基因型为：F- mcrA Δ(mrrhsdRMSmcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ- rpsL nupG/pMON14272/pMON7124 。
使用方法：
1. 制备含有如下抗生素的 LB 固体平板：50 μ g/mL Kanamycin，7 μ g/mL gentamicin，10 μg/mL tetracycline，100 μg/mL X-gal，40 μg/mL IPTG。
2. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100 μL，可以根据实际情况分装使用。以下实验以 100 μL 感受态细胞为例。
3. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入 1-10 ng 重组质粒，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴 30 分钟。
4. 42℃热击 90 秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置 2-3 分钟。
5. 每个离心管中加入 900 μL 无菌的 SOC（不含抗生素），混匀后置于 37℃ 摇床， 200rpm 振荡培养 4 小时。
6. 用 SOC 培养基进行 10 倍梯度稀释，如分成 3 个稀释梯度 10-1,10-2,10-3。
7. 取 100 μL 的各个梯度的培养物用于涂布。等平板中的液体完全吸收后，倒置平板， 37℃培养 24-48 小时。 8. 保留剩余的菌液保存于 4℃，视平板上菌落生长情况决定去留。

pFB-LIC-Bse（pFBLICBse）
pG1
pGEX-20T（pGEX20T）（60908-3750）
pGL4.29[luc2P CRE Hygro]（60908-3990）
pGSTag
pHP34
pICEM19R+大鼠骨骼肌细胞完全培养基100mL
鞘氨醇杆菌属 Sphingobacterium sp.
黑曲霉 Aspergillus niger
大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
RBE(人胆管细胞)5×106cells/瓶×2
杆菌属 Lactobacillus sp.
根瘤菌 Rhizobium sp.
TMB底物显色试剂盒(沉淀型)100ml国产
酸球菌亚种 Lactococcus lactis subsp. lactis
灰葡萄孢
枯草芽胞杆菌 Bacillus subtilis
Hacat(人永生化角质形成细胞)5×106cells/瓶×2
酸球菌亚种 Lactococcus lactis subsp. lactis
苜蓿中华根瘤菌 Sinorhizobium meliloti
Saos-2(人骨肉瘤细胞)5×106cells/瓶×2
pIRES（60908-4240y）
pJQ210KS
pKT240
pLenti-EF1a-C-Myc-DDK-IRES-Puro(pLentiEF1aCMycDDKIRESPuro)
pLL3.7（60908-4543）
pLVX-Hom-Nuc1(pLVXHomNuc1)
pMbac
pMCSG31 (linearized)