无脊椎动物种属鉴定 PCR Mix100 次成分产品及特点:
易错 PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校对功能的特性,在一定条件下(如不同的 dNTP 浓度、Mg 浓度和 MnCl2存在)能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法,则可从构建的突变库选出所需突变体。易错 PCR 和常规 PCR 的比较如下:本产品就是专门为广大的研究工作者进行易错 PCR 而开发,本产品具有下列特点:
1. 即开即用,十分简单方便,尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。
2. 配方经过精心优化,突变率稳定,突变没有趋向性。易错 PCR 的突变率为 0.66% (±0.13%),详见使用手册疑难解答。
3. 比体内基因突变更快捷简单,但如果在 PCR 引物中设计位点,则可使产物克隆到表达载体,也可以用于体内蛋白活性的筛选。
4. 可用于连续易错 PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易错 PCR 的产物用作下一次易错 PCR 的模板即可,使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
5. 只适用于扩增 1kb 以下的产物,对于 1kb 以上的产物,建议分段扩增。
无脊椎动物种属鉴定 PCR Mix100 次成分产品介绍:
规格及成分:
使用方法:
1. 以 30 uL 的标准 PCR 反应体系为例,如果反应体系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或减少。在一干净的 PCR 管中,加入下列成分:易错 PCR Mix, 10× 3 uL 易错 PCR 专用 dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自备 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自备,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 补水到 30 uL
2. 按已经优化的 PCR 条件进行一定循环数的 PCR(循环数与突变率的关系见下表),然后取 5 uL 电泳检查。如果没有优化的 PCR 条件,一般可以先尝试下面的 PCR 条件: PCR 前变性 94℃ 3 分钟易错 PCR 94℃ 1 分钟 45℃ 1 分钟 循环 30 次(见注) 72℃ 1 分钟注:易错 PCR 一般不需要热启动,也不需要在 PCR 结束后做延伸处理。
3. 电泳检测是否得到预计长度的 PCR 产物。
mApple
p11
pAcGFP1-N1(pAcGFP1N1)(60908-291y)
pAG416GPD-ccdB-DsRed(pAG416GPDccdBDsRed)
pAP-1-Luc(pAP1Luc)(pAP-1-Lucifer)
pBad/Myc-His A (pBadMycHisA)(60908-670)
pBI221(60908-760)
pBP111
pCAMBIA0390
pcDNA3-CFP (pcDNA3CFP)(60908-1610)
pcDNA6.2/nLumio-DEST(pcDNA6.2nLumioDEST)
pCMV-3Tag-4C(pCMV3Tag4C)
pCMV6-AC-FP602(pCMV6ACFP602)
pCold III (pColdIII)(60908-2350)y
pd2EYFP-N1(pd2EYFPN1)
pDONR221(60908-2426)
pECFP
pENTR-GFP(pENTRGFP)(60908-2740)
pET-39b(+)(pET39b)(60908-2804)yHA(人羊膜细胞)5×106cells/瓶×2
酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
黑绿木霉
人食道组织来源细胞英文名称:HEF
SKOV3 [SK-OV-3], 人卵巢腺细胞系
屎肠球菌 Enterococcus faecium
香菇 Lentinula edodes
Cell Counting Kit-8 (CCK-8试剂盒)规格:1000次
酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
纯白链霉菌 Streptomyces candidus
人脑膜细胞完全培养基100mL
MEF, 小鼠胚胎成纤维细胞
酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
庆丰链霉菌 Streptomyces qingfengmyceticus
Acc-2(人涎腺腺样囊性细胞)5×106cells/瓶×2
酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
金龟子绿僵菌 Metarhizium anisopliae
人肺鳞细胞英文名称:NCI-H520
MCF-7(MCF7)(ATCC来源), 人腺细胞 Human
鼠李糖杆菌 Lactobacillus rhamnosus