dNTP 和引物清除剂100 次特点使用方法:
1. 以 30 uL 的标准 PCR 反应体系为例,如果反应体系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或减少。在一干净的 PCR 管中,加入下列成分:易错 PCR Mix, 10× 3 uL 易错 PCR 专用 dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自备 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自备,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 补水到 30 uL
2. 按已经优化的 PCR 条件进行一定循环数的 PCR(循环数与突变率的关系见下表),然后取 5 uL 电泳检查。如果没有优化的 PCR 条件,一般可以先尝试下面的 PCR 条件: PCR 前变性 94℃ 3 分钟易错 PCR 94℃ 1 分钟 45℃ 1 分钟 循环 30 次(见注) 72℃ 1 分钟注:易错 PCR 一般不需要热启动,也不需要在 PCR 结束后做延伸处理。
3. 电泳检测是否得到预计长度的 PCR 产物。
dNTP 和引物清除剂100 次特点产品及特点:
易错 PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校对功能的特性,在一定条件下(如不同的 dNTP 浓度、Mg 浓度和 MnCl2存在)能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法,则可从构建的突变库选出所需突变体。易错 PCR 和常规 PCR 的比较如下:本产品就是专门为广大的研究工作者进行易错 PCR 而开发,本产品具有下列特点:
1. 即开即用,十分简单方便,尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。
2. 配方经过精心优化,突变率稳定,突变没有趋向性。易错 PCR 的突变率为 0.66% (±0.13%),详见使用手册疑难解答。
3. 比体内基因突变更快捷简单,但如果在 PCR 引物中设计位点,则可使产物克隆到表达载体,也可以用于体内蛋白活性的筛选。
4. 可用于连续易错 PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易错 PCR 的产物用作下一次易错 PCR 的模板即可,使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
5. 只适用于扩增 1kb 以下的产物,对于 1kb 以上的产物,建议分段扩增。
产品介绍:
规格及成分:
微量核酸沉淀剂
超快核酸转膜试剂盒
dNTP溶液,100mM(5 mL)
单细胞全基因组扩增试剂盒
克必隆零背景T载体(暂停供货)
酿酒酵母Y187感受态细胞
克必隆G载体
酿酒酵母NMY51感受态细胞
动物细胞裂解液(A)
亲和层析柱
重组蛋白A/G
长效期SDS-PAGE电泳液(干粉)A(>30 KD)
PCNA小鼠单抗(100 μL)泾阳链霉菌 Streptomyces jingyangensis
NCI-H596(人肺腺鳞细胞)5×106cells/瓶×2
肉桂色曲霉 Aspergillus cinnamomeus
苜蓿中华根瘤菌 Sinorhizobium meliloti
NEC(人食管细胞)5×106cells/瓶×2gersion
斯氏李斯特氏菌 Listeria seeligeri
立枯丝核菌 Rhizoctonia solani
人角膜成纤维细胞完全培养基100mL
酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
海枣曲霉 Bacillus horikoshii
苏云金芽胞杆菌蜡螟亚种 Bacillus thuringiensis subsp. galleriae
大鼠雪旺氏细胞完全培养基100mL
宇佐美曲霉 Aspergillus usamii
香菇 Lentinula edodes
人肝细胞英文名称:Li-7
植物杆菌 Lactobacillus plantarum
热带假丝酵母 Candida tropicalis
褐球固氮菌
大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
HT-29(人结肠细胞)5×106cells/瓶×2
乙烯乙二醇
大肠杆菌PCR检测试剂盒
冠状病毒(OC43/HKU1)PCR检测试剂盒
利什曼原虫PCR检测试剂盒
破伤风杆菌PCR检测试剂盒
人遗传小脑共济失调PCR检测试剂盒
鸭瘟病毒PCR检测试剂盒