预混型丙烯酰胺 - 甲叉双丙烯干粉 (29:1)100g说明产品及特点:
尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Urea PAGE)是目前分离 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是单独配制各种溶液十分繁琐,为此天泽基因开发了本产品。它具有下列特点:
1. 一站式,含有电泳所需要的所有试剂,即开即用,十分方便,免去了实验人员称取有毒物品。
2. 灵活,可以根据需要配制各种浓度的 Urea-PAGE,以便对长度各异的 RNA 进行电泳。
3. 电泳后可直接用于 UV 观察、银染、胶回收、Northern 杂交和放射自显影等。
4. 使用新型缓冲液,可以防止甘油的干扰。
预混型丙烯酰胺 - 甲叉双丙烯干粉 (29:1)100g说明产品介绍:
预混型丙烯酰胺 - 甲叉双丙烯干粉 (29:1)100g说明使用方法:
一、准备工作
1. 用固相 RNase 清除剂清洁工作的台面和器皿(详见该产品的使用手册)。
2. 配制 1 X 电泳缓冲液 将适量的 10X 电泳缓冲液用 RNase-free 水稀释 10 倍,得到 1X 电泳缓冲液待用。
3. 配制 10%过硫酸铵溶液精确称取约 100 mg 过硫酸铵到一干净的 1.5 mL 离心管中,按每 1 mg 过硫酸铵加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水,摇晃致溶,立即使用。注意:放置时间不要超过一周。
二、配制凝胶
1. 估计所需要的凝胶溶液的体积,一般配制一块 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的胶需要 15 mL 凝胶溶液,配制一块 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的胶需要 120 mL 凝胶溶液。
2. 新鲜的 40%的丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液的配制:在装有 60g 丙烯酰胺干粉的瓶中加入约 130 mL 自备的去离子水,然后将全部甲叉双丙烯酰胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液冲洗出来以避免粉末有毒粉末飘出。甲叉双丙烯酰胺溶解度低,不会溶解在这少量溶液中)。充分摇晃混匀后所得溶液即 40%的 Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是这样可以在下步留出足够空间加尿素。
3. 根据所需要的凝胶溶液的体积,在一的干净的三角瓶中按下表加入各成分。
后续处理:
1. 染色观察:将凝胶一面的玻璃板揭开,直接用仍然附着在另一玻璃板上的凝胶进行各种染色,包括银染(固定、漂洗、显影和定影等步骤)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL 的 EB 溶液)、天泽基因低毒核酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液)。 UV 下观察并拍照。
2. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下确定所需要的 miRNA 条带的位置,切胶后进行胶回收处理。
3. Northern 杂交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下确定所需要的 miRNA 条带的位置,切胶后电转移到带正电的尼龙膜上,然后进行杂交处理。
4. 放射自显影:如果 miRNA 样品电泳前经过同位素标记,则将凝胶一面的玻璃板揭开,用滤纸将附着在另一玻璃板上的凝胶吸附过来,然后包上保鲜膜,真空抽干,然后使胶跟 X 光片向对置进行放射自显影。
Mueller-Ranki荼酯六偶氮品红法非特异脂酶显色试剂盒
醛复红改良染色法HBV表面抗原染色试剂盒
Bicine Buffer,0.5M,pH9.0
Chaps Lysis Buffer
FCS Blocking Buffer in TBS
HEPES Buffered Saline,5X,pH7.0
Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH6.5
Normal Tyrode’s Bicarbonate Buffered Solution
Phosphate Citrate Buffer,2X
RIPA Buffer with Triton and Glycerol,2X
Sodium Carbonate Bicarbonate,0.5M,pH8.5
TBE Urea Sample Buffer,2X
Tris-Caps Buffer,10X
1435 pSG5L Flag HA(1435pSG5LFlagHA)
Carnegie 1羊IgG1 ml国产
小鼠腺上皮细胞完全培养基100mL
植物杆菌 Lactobacillus plantarum
不动杆菌 Acinetobacter sp.
EJ(人膀胱细胞)5×106cells/瓶×2
酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
平菇 Pleurotus sp.
成人表皮角化细胞完全培养基100mL
宇佐美曲霉变种 Aspergillus usamii var.
平菇 Pleurotus sp.
显影粉10包(10 × 250 ml)国产
HL-02 [L-02,HL-7702], 正常人肝上皮细胞
烟草节杆菌 Arthrobacter nicotianae
大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
LoVo(人大肠细胞)5×106cells/瓶×2
泡盛曲霉 Aspergillus awamori
预混型丙烯酰胺 - 甲叉双丙烯干粉 (29:1)100g说明fBH 16(fBH16)
kanMX4
L3812
lambda gt11(lambdagt11)
mClavGR2
p3xFLAG-CMV-8(p3xFLAGCMV8)
pAcHLT A