脉冲电泳 Marker(Lambda LadderPFG)50 次特价使用方法:
一、准备工作
1. 用固相 RNase 清除剂清洁工作的台面和器皿(详见该产品的使用手册)。
2. 配制 1 X 电泳缓冲液 将适量的 10X 电泳缓冲液用 RNase-free 水稀释 10 倍,得到 1X 电泳缓冲液待用。
3. 配制 10%过硫酸铵溶液精确称取约 100 mg 过硫酸铵到一干净的 1.5 mL 离心管中,按每 1 mg 过硫酸铵加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水,摇晃致溶,立即使用。注意:放置时间不要超过一周。
二、配制凝胶
1. 估计所需要的凝胶溶液的体积,一般配制一块 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的胶需要 15 mL 凝胶溶液,配制一块 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的胶需要 120 mL 凝胶溶液。
2. 新鲜的 40%的丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液的配制:在装有 60g 丙烯酰胺干粉的瓶中加入约 130 mL 自备的去离子水,然后将全部甲叉双丙烯酰胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液冲洗出来以避免粉末有毒粉末飘出。甲叉双丙烯酰胺溶解度低,不会溶解在这少量溶液中)。充分摇晃混匀后所得溶液即 40%的 Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是这样可以在下步留出足够空间加尿素。
3. 根据所需要的凝胶溶液的体积,在一的干净的三角瓶中按下表加入各成分。
后续处理:
1. 染色观察:将凝胶一面的玻璃板揭开,直接用仍然附着在另一玻璃板上的凝胶进行各种染色,包括银染(固定、漂洗、显影和定影等步骤)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL 的 EB 溶液)、天泽基因低毒核酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液)。 UV 下观察并拍照。
2. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下确定所需要的 miRNA 条带的位置,切胶后进行胶回收处理。
3. Northern 杂交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下确定所需要的 miRNA 条带的位置,切胶后电转移到带正电的尼龙膜上,然后进行杂交处理。
4. 放射自显影:如果 miRNA 样品电泳前经过同位素标记,则将凝胶一面的玻璃板揭开,用滤纸将附着在另一玻璃板上的凝胶吸附过来,然后包上保鲜膜,真空抽干,然后使胶跟 X 光片向对置进行放射自显影。
脉冲电泳 Marker(Lambda LadderPFG)50 次特价产品及特点:
尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Urea PAGE)是目前分离 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是单独配制各种溶液十分繁琐,为此天泽基因开发了本产品。它具有下列特点:
1. 一站式,含有电泳所需要的所有试剂,即开即用,十分方便,免去了实验人员称取有毒物品。
2. 灵活,可以根据需要配制各种浓度的 Urea-PAGE,以便对长度各异的 RNA 进行电泳。
3. 电泳后可直接用于 UV 观察、银染、胶回收、Northern 杂交和放射自显影等。
4. 使用新型缓冲液,可以防止甘油的干扰。
脉冲电泳 Marker(Lambda LadderPFG)50 次特价产品介绍:
紫芝 Ganoderma japonicum
芽胞杆菌 Bacillus sp.
COLO全细胞裂解液100μg100μg
蓝微褐链霉菌 Streptomyces cyaneofuscatus
人皮肤成纤维样细胞英文名称:HSF
MM, 小鼠小胶质细胞
异常汉逊酵母 Hansenula anomala
亚侧耳 Hohenbuehelia serotina
AtT-20(小鼠垂体瘤细胞)5×106cells/瓶×2
酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
红曲霉 Monascus ankaMethanococcus deltae medium
Microcella alkaliphila medium
MS medium (modified)
Papillibacter medium
PYG medium (e)
Sabourand glucose medium
Sporomusa medium (marine)
Tepidibacter medium
Thermus ruber medium
TTD medium
干粉型LB-Lennox培养基
大肠杆菌Novablue(DE3)菌种
3T3-Swiss albino细胞株
BHK-21 细胞株
CTLL-2[CTLL2]细胞株
Hela-GFP [HelaGFP]细胞株
L7712细胞株
MS751细胞株
PATU-8988 [PATU8988]细胞株
人高转移肺细胞英文名称:95-D
SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人细胞 Human
脉冲电泳 Marker(Lambda LadderPFG)50 次特价鼠李糖杆菌 Lactobacillus rhamnosus
苏云金芽孢杆菌 Bacillus thuringiensis
SW 1353(人骨肉瘤细胞)5×106cells/瓶×2