液相内毒素清除剂100 次原理产品及特点:
本产品是天泽基因在柱式血液 RNAOUT(CAT#:71202)基础上开发的大提升级产品,专门从动物全血样品中快速提取总 RNA。跟柱式血液 RNAOUT 相比,本产品具有下列特点:
1. 大量提取,每次Z多可处理 30mL 血液。
2. 操作简单快捷,直接使用新鲜的或冷冻的抗凝全血样品,不需要裂解红细胞等任何预处理步骤,整个提取过程只需要十分钟左右,可以全在室温下进行。
3. 纯度高,OD260/OD280 均在 2.0 左右,得到的 RNA 可以直接用于 RT-PCR 和 Northern 杂交等研究。
4. 产率一般为 2-5ug/mL 人血。 5. 与常用的抗凝剂(包括肝素,EDTA,柠檬酸钠,草酸钠)兼容。
液相内毒素清除剂100 次原理使用方法:
1. 将 10-30 mL 新鲜或解冻后的抗凝全血加入到 50 mL 塑料离心管中。
2. 12000-15000 g 室温离心 5 分钟,弃上清(血浆)。
3. 将 20 mL 溶液 A 加入到血液细胞沉淀中,用移液枪吹打沉淀使细胞裂解。
4. 将 6 mL 的溶液 B 和 4 mL 加入到离心管中,剧烈震荡 30 秒。
5. 12000-15000 g 室温离心 3-5 分钟,将上清液(为无色或浅红色)转移到另一干净离心管中。注意:转移的液体不要超过 25 mL,否则下一步不能加入等体积的溶液 C。为防止污染,Z好留少量上清液。下层有机相一般呈深红色,中间层为白色,含有 DNA,蛋白质和其他细胞破碎物,避免触及或吸取。
6. 加入等体积的溶液 C,充分颠倒混匀。
7. 分两次将溶液转移到离心吸附柱中,每次转移后 12000-15000 g 室温离心半分钟,弃穿透液。
8. 加 25 mL 通用洗柱液,室温离心半分钟,弃穿透液。
9. 重复步骤 8 一次。
10. 室温 12000-15000 g 离心半分钟。此步十分重要,否则残留的通用洗柱液会影响 RNA 的后续反应。
11. 将离心吸附柱转移到一个新的离心管中,加入 1mL RNA 洗脱液,室温放置 1-2 分钟。
12. 12000-15000 g 室温离心半分钟,离心管中溶液即为 RNA 样品,可以立即使用或存放于-80℃待用。
13. RNA 完整性的电泳检测:如果需要做 Northern 杂交,强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA 电泳,因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子(BioTechniques,28:414,2000)。
14. RNA 产量产率测定:将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260 的 RNA=40 μg/mL),进而计算出 RNA 的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA 产量/组织用量)。人血 RNA 产率一般为 2-5 ug/mL。
15. RNA 纯度测定:无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 2.0 左右(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响 RT-PCR 等反应。
产品介绍:
血液 RNA 提取方法及注意事项血液:
RNA 提取的方法可以细分为需要预先处理和不需要预先处理两类。众所周知,人和其他哺乳动物血液只有白细胞(不到总数的 5%)等少量细胞含有 RNA,需要预先处理的血液 RNA 提取法其实就是分离白细胞再提取 RNA,本质上是白细胞 RNA 提取。分离白细胞的方法有 Ficoll-Hypaque 密度离心法(白细胞在 Buffy Coat 中)和红细胞裂解法。由于预处理操作会剧烈改变血液 RNA 含量(British J. Haematol., 126:231, 2004),所以无预处理提取法将是未来提取血液 RNA 的发展方向。白细胞 RNA 提取和全血 RNA 提取都需注意以下问题:
一、血液越新鲜越好,因血液细胞内外都有大量 RNase,容易使 RNA 降解。血液在 4℃的放置时间Z好不要超过四天;
二、尽可能YZ或灭HX液特有的 RNase(如 EDN, ECP),因为它们不但跟 RNase A 一样非常稳定,而且不被 RNase Inhibitor 和 RVC YZ,还能YZ逆转录酶的活性,它们残留在 RNA 样品中不但会降解 RNA,还会干扰后续的 RT-PCR 反应;
三,血液富含糖蛋白,粘蛋白和血红蛋白,提取需要去除糖蛋白污染;四,由于 RNA 量少,提取时很容易丢失,可以适当使用核酸沉淀助沉剂;五,血液细胞量随生理病理因素变化波动性大,注意调整血液和提取试剂的Z佳用量。Z简单的方法是使用已经经过厂家优化的产品,比如用于白细胞 RNA 提取的 TRIzol、QIAamp RNA Blood Mini Kit 和天泽基因的动物 RNAOUT;用于全血 RNA 提取的 TRIzol LS,PAXgene Blood RNA Kit 和天泽基因的全血 RNAOUT 和柱式血液 RNAOUT。
HAT混合盐/HAT Media Supplement (50×) Hybri-Max™γ射线灭菌1vailSigmaH0262原装
人胚肺成纤维样细胞(男)英文名称:HEL1
YM肉汤/YM BrothBR250克国产/进口
人非小细胞肺细胞英文名称:HCC827
酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂/YPD琼脂/YEPD琼脂/Yeast Extract Peptone Dextrose Agar生物制品和蜜浆制剂酵母菌总数测定250克国产/进口
大鼠嗅鞘细胞完全培养基100mLpET-44c(+)(pET44c)
pETG-30A(pETG30A)
pFA6a-6xGLY-T7-hphMX4(pFA6a6xGLYT7hphMX4)
pFL64+
pGBDU-C3(pGBDUC3)
pGIPZ control (pGIPZcontrol)(60908-3865)
pGL4.75[hRluc CMV](60908-3921)
pHD_v2(pHDv2)(60908-4081)
pHSG250
pIEx/Bac-4(pIEx/Bac4)(pIExBac4)
pJAK13
pKD13(60908-4402)
pLenti CMV Puro DEST(pLentiCMVPuroDEST)(60908-4506)
pLentiCRISPR cas9 v.1(lentiCRISPRcas9 v.1)
pLTRdhfr26/Common Nutrient Agar一般细菌的培养,分离培养霍乱弧菌,埋迪霉菌鉴定用250克国产/进口
成人表角化细胞完全培养基100mL
亚硫酸铋琼脂/BS琼脂/Bismuth Sulfite Agar用于食品中沙门氏菌的检验250克国产/进口
SK-Hep-1(人肝细胞)5×106cells/瓶×2
NCI-H358(人非小细胞肺细胞)5×106cells/瓶×2
NIH/3T3, 小鼠成纤维细胞系gersion
BGC-803(人胃细胞)5×106cells/瓶×2