动物 DNAout250mL实验方法

动物 DNAout250mL实验方法使用方法:

1. 将 10-30 mL 新鲜或解冻后的抗凝全血加入到 50 mL 塑料离心管中。
2. 12000-15000 g 室温离心 5 分钟，弃上清(血浆)。
3. 将 20 mL 溶液 A 加入到血液细胞沉淀中，用移液枪吹打沉淀使细胞裂解。
4. 将 6 mL 的溶液 B 和 4 mL 加入到离心管中，剧烈震荡 30 秒。
5. 12000-15000 g 室温离心 3-5 分钟，将上清液(为无色或浅红色)转移到另一干净离心管中。注意：转移的液体不要超过 25 mL，否则下一步不能加入等体积的溶液 C。为防止污染，Z好留少量上清液。下层有机相一般呈深红色，中间层为白色，含有 DNA，蛋白质和其他细胞破碎物，避免触及或吸取。
6. 加入等体积的溶液 C，充分颠倒混匀。
7. 分两次将溶液转移到离心吸附柱中，每次转移后 12000-15000 g 室温离心半分钟，弃穿透液。
8. 加 25 mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。
9. 重复步骤 8 一次。
10. 室温 12000-15000 g 离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响 RNA 的后续反应。
11. 将离心吸附柱转移到一个新的离心管中，加入 1mL RNA 洗脱液，室温放置 1-2 分钟。
12. 12000-15000 g 室温离心半分钟，离心管中溶液即为 RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
13. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做 Northern 杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA 电泳，因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子（BioTechniques，28：414，2000）。
14. RNA 产量产率测定：将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260 的 RNA=40 μg/mL），进而计算出 RNA 的产量（浓度 X 体积)和产率(RNA 产量/组织用量)。人血 RNA 产率一般为 2-5 ug/mL。
15. RNA 纯度测定：无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 2.0 左右(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响 RT-PCR 等反应。
动物 DNAout250mL实验方法产品介绍：

产品及特点:
本产品是天泽基因在柱式血液 RNAOUT（CAT#：71202）基础上开发的大提升级产品，专门从动物全血样品中快速提取总 RNA。跟柱式血液 RNAOUT 相比，本产品具有下列特点：
1. 大量提取，每次Z多可处理 30mL 血液。
2. 操作简单快捷，直接使用新鲜的或冷冻的抗凝全血样品，不需要裂解红细胞等任何预处理步骤，整个提取过程只需要十分钟左右，可以全在室温下进行。
3. 纯度高，OD260/OD280 均在 2.0 左右，得到的 RNA 可以直接用于 RT-PCR 和 Northern 杂交等研究。
4. 产率一般为 2-5ug/mL 人血。 5. 与常用的抗凝剂（包括肝素，EDTA，柠檬酸钠，草酸钠）兼容。 
血液 RNA 提取方法及注意事项血液：
RNA 提取的方法可以细分为需要预先处理和不需要预先处理两类。众所周知，人和其他哺乳动物血液只有白细胞（不到总数的 5%）等少量细胞含有 RNA，需要预先处理的血液 RNA 提取法其实就是分离白细胞再提取 RNA，本质上是白细胞 RNA 提取。分离白细胞的方法有 Ficoll-Hypaque 密度离心法（白细胞在 Buffy Coat 中)和红细胞裂解法。由于预处理操作会剧烈改变血液 RNA 含量（British J. Haematol.， 126:231， 2004），所以无预处理提取法将是未来提取血液 RNA 的发展方向。白细胞 RNA 提取和全血 RNA 提取都需注意以下问题：
一、血液越新鲜越好，因血液细胞内外都有大量 RNase，容易使 RNA 降解。血液在 4℃的放置时间Z好不要超过四天；
二、尽可能YZ或灭HX液特有的 RNase（如 EDN， ECP），因为它们不但跟 RNase A 一样非常稳定，而且不被 RNase Inhibitor 和 RVC YZ，还能YZ逆转录酶的活性，它们残留在 RNA 样品中不但会降解 RNA，还会干扰后续的 RT-PCR 反应；
三，血液富含糖蛋白，粘蛋白和血红蛋白，提取需要去除糖蛋白污染；四，由于 RNA 量少，提取时很容易丢失，可以适当使用核酸沉淀助沉剂；五，血液细胞量随生理病理因素变化波动性大，注意调整血液和提取试剂的Z佳用量。Z简单的方法是使用已经经过厂家优化的产品，比如用于白细胞 RNA 提取的 TRIzol、QIAamp RNA Blood Mini Kit 和天泽基因的动物 RNAOUT；用于全血 RNA 提取的 TRIzol LS，PAXgene Blood RNA Kit 和天泽基因的全血 RNAOUT 和柱式血液 RNAOUT。

QSG-7701(人正常肝细胞)5×106cells/瓶×2gersion
CEM/C1(人急性淋巴细胞白血病细胞)5×106cells/瓶×2
mRTEC, 小鼠肾小管上细胞gersion
RBE(人胆管细胞)5×106cells/瓶×2
IBRS-2(猪肾细胞)5×106cells/瓶×2
CCD-1095Sk(人腺浸润性导管旁肤细胞)5×106cells/瓶×2
F81(猫肾细胞)5×106cells/瓶×2
小鼠肾小管上细胞完全培养基100mL
BABL/C小鼠胚胎细胞英文名称：BABL/C2
小鼠肠动脉内细胞完全培养基100mL
Ampicillin(100mg/ml,1000X)规格：5*1ml
人视网膜微血管内细胞完全培养基100mL
M-FC琼脂/滤膜粪大肠菌琼脂/M-FC Agar大肠杆菌群的滤膜法检测250克国产/进口
人淋巴血管内细胞完全培养基100mL
大肠菌群显色培养基/Coliform Chromogenic Medium快速准确检测大肠菌群，大肠菌群培养24小时，显兰色1升国产/进口Desulfosarcina medium (brackish water)
EBA medium
Glucose yeast extract medium
Halorhabdus utahensis medium
Lactobacillus kefiranofaciens
Medium for chlorate respirers
Methanomicrobium paynteri medium
Mineral medium with benzylcyanide as nitrogen source
Nautilia medium
Petrotoga halophila medium
R3 medium
Sehgal and gibbons medium
Succinate minimal salts medium (sms)
Thermoanaerobacter sulfurophilus medium
Thiohalophilus medium
Vy/4-sws agar