新城疫病毒/禽流感病毒H5/H7亚型三通道核酸检测试剂盒

        新城疫病毒/禽流感病毒H5/H7亚型三通道核酸检测试剂盒

（我司同时有登革热，克锥虫，丝虫，非洲锥虫，恙虫，无形体，立次克体，基孔肯热，寨卡病毒，黄热病检测试剂盒，各种质控品，抗原，）

【产品名称】

通用名称：新城疫病毒/禽流感病毒H5/H7亚型三通道核酸检测试剂盒

英文名称：Detection Kit for Avian Influenza Virus Subtype H5 RNA (PCR-Fluorescence Probing)

【包装规格】大包装，24 反应/盒；大包装，48 反应/盒

需自备的试剂：核酸提取试剂

质控品说明：阳性质控品为含目的片段的重组质粒，使用时无需进行核酸提取。

【储存条件及有效期】

试剂盒保存于-20±5℃，有效期 9 个月。

试剂盒在 37℃可保存72h；试剂在 4℃可保存7天；避免反复冻融，反复冻融次数不超过 7 次；试剂开瓶次数不超过 7 次。运输采用干冰保持低温，运输时间不应超过 3 天。试剂盒生产日期见产品标签。

【适用仪器】ABI 7500、ABI 7300、LightCycler480 等荧光定量 PCR 仪。

【样本要求】

新城疫病毒核酸检测试剂盒

1. 适用样本类型：咽喉拭子、泄殖腔拭子、肌肉或脏器样本等。
2. 样品采集与前处理（注意无菌操作）
3. 活禽样品——取咽喉拭子和泄殖腔拭子，或新鲜粪便拭子，具体采集方法如下：·咽喉拭子，采取时要将拭子深入喉头及上腭裂来回刮3～5次，取咽喉分泌液；·取泄殖腔拭子时，将拭子深入泄殖腔转一圈沾取粪便；对于易造成损伤的小珍禽，直接用拭子沾取适量新鲜粪便；·将咽喉拭子和泄殖腔拭子一起放入盛有1.0ml PBS的Eppendoff管中，编号备用。
4. 内脏或肌肉样品——用无菌镊剪夹取待检样品2.0g于研钵中充分研磨，再加10mlPBS混匀，或置于组织匀浆器中，加入10mlPBS匀浆，然后将组织悬液转入无菌Eppendoff管中3,000 rpm离心10 min，取上清液转入Eppendoff管中，编号备用。

3. 保存与运送

请遵循目前的流感标本采集方案以及标准的流感标本储存、包装和运送标准和相应的国际航空运输协会的规定。

【检验方法】

1.样本处理和核酸提取（样本处理区）

建议取 200μl 液态样本进行核酸提取；组织样本可以研磨液进行提取操作。可采用通用的核酸提取试剂盒，请按照试剂盒说明书进行操作；也可选择其他合适的商业化产品。

本试剂盒中的阴性质控品参与提取，用于对环境进行监控；AIV H5 阳性质控品不参与提取，用于 PCR 检测试剂的质控。

3.3 LightCycler480 仪器设置

1. 点击软件主界面的“New Experiment”,进入程序设定界面。

 检测模式设置：从 Detection Format 的下拉框中选择分析模式：Multi Color Hydrolysis Probe,“Customizes”模块中选择 483-533 滤片组合，“Block Type”为仪器自动检测， “Plate ID”可手工输入或扫描仪扫描，“Reaction Volume”设定为 25ul。

1. 循环参数：定义 PCR 程序中每个步骤（Program Name）及循环数(Cycles)和分析模式(Analysis Mode),利用“+”和“-”增加或删除步骤，扩增参数如下

50℃ 15 分钟，1 个循环；

95℃ 15 分钟，1 个循环；

94℃ 15 秒* 58℃ 45 秒，40 个循环；（此步采集荧光信号：“Analysis Mode”选择“Quantification”,“Acquisition Mode”选择“Single”）

40℃ 10 秒，1 个循环；

1. 填样品表：点击“SampleEditor”模块，进入样本信息编辑界面，在“SelectWorkflow”中选择“AbsQuant”,在“SampleName”

列中定义样本名称,在“Sample Type”栏中选定样品类型：阴性质控品选 NTC；未知样品选 Unknown。

1. 运行程序：点击“Experiment”模块，回到程序设定界面，点击窗口右下方的“StartRun”,弹出结果保存窗口，输入文件名和路径后进入程序运行界面。

4. 结果分析

4.1 反应结束后保存检测数据文件。

4.2 分析条件设置：根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值、stop 值以及 Threshold 的 Value 值（用户可根据实际情况自行调整， Start 值可以在 3～15、End 值可设在 5～20，调整阴性对照的扩增曲线平直或低于阈值线），点击 Analysis 自动获得分析结果，在 Report 界面察看结果。

4.质量控制

阴性质控品：扩增曲线无对数增长期；阳性质控品：扩增曲线有明显对数增长期，且 Ct 值≤32；

以上要求需在同一次实验中同时满足，否则，本次实验无效，需重新进行。

5.结果判定

1. 如果检测样品的扩增曲线无对数增长期或 Ct 值＞38，可判样品为禽流感 H5 亚型阴性；

2. 如果检测样品 Ct 值≤38，且曲线有明显的对数增长期，可判样品为禽流感 H5 亚型阳性。

【检测方法的局限性】

样本检测结果和样本收集、处理、运送及保存质量有关，其中任何失误都将会导致假阴性结果。如果样本处理时没有控制好交叉污染，可能出现假阳性结果。

【产品性能指标】

根据产品分析性能评估结果，本试剂盒的灵敏度为 1.0×10³copies/ml。与感染部位相同或感染症状相似的其他病原体（副流感病毒、新城疫病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒等）无交叉反应。

【注意事项】

1.本产品仅用于体外诊断；

2.实验室管理应严格按照 PCR 基因扩增实验室的管理规范，实验人员必须进行专业培训，实验过程严格分区   进行（试剂准备区、标本制备区、扩增和产物分析区），所用消耗品应灭菌后一次性使用，实验操作的每个   阶段使用专用的仪器和设备，各区各阶段用品不能交叉使用；

3.为试剂和标本准备阶段提供生物安全柜，实验过程中穿工作服，带一次性手套，使用自卸管移液器；

4.试剂使用前要完全解冻，8,000rpm 离心数秒后使用；

5.标本制备区所用过的吸头请打入盛有消毒剂的容器，并与废弃物一起灭菌后方可丢弃；

6.实验完毕用 10%次氯酸或 75%酒精处理工作台和移液器,然后用紫外线灯照射 20－30 分钟；

7.本试剂盒内阳性质控品应视为具有传染性物质，操作和处理均需符合相关法规要求：卫生部《微生物生物

医学实验室生物安全通用准则》和《YL废物管理条例》。                                     

新城疫病毒/禽流感病毒核酸检测试剂盒

广州创仑禽流感病毒通用型核酸检测试剂盒                                            禽流感病毒H9亚型核酸检测试剂盒

禽流感病毒H9亚型核酸检测试剂盒                            

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