B. 清洁Langendorff管路,每次使用前先用1000ml蒸馏水冲洗,打开水浴循环,再用K-H液将整个管路系统进行冲洗。
C. 鲁米钠腹腔注射麻醉动物(100mg/kg),并向肝静脉注射100IU肝素,颈动脉放血处死动物,同时快速分离心脏,放入4℃K-H液中挤净血液并称重。
D. 将心脏迅速固定在Langendorff 灌流系统中,通过主动脉以85cmH2O压力逆行灌注,通过肺静脉插入导管至左心房。
E. 心脏复跳后,将一个球囊插入心脏左心室,球囊和压力换能器相连,在电脑上记录左室内压,调整左室舒张内压(LVEDP)在4~10mmHg之间。待心脏左室收缩压(LVESP)稳定后且大于80mmHg,心率大于200次/分,可继续实验,并记录心电图(ECG)、主动脉流量(AF)、冠脉流量(CF)、左室收缩末压(LVESP)等指标。
F. 缺血再灌注方案:关闭灌流液,停灌心脏45min后,打开灌流液进行复灌90min(复灌起始15min通过肺静脉给予一定的压力辅助),同时记录相关指标。