人白血病T细胞;Jurkat细胞实验步骤

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人白血病T细胞;Jurkat细胞实验步骤培养有关处理方法如下：
收到冻存细胞的处理方法：
1.37°C水浴预热培养基；
2.从液氮中取出细胞迅速放入37°C水浴快速解冻（解冻后不要继续暖细胞）；
3.在超净台中加入5ml培养基重悬细胞，1000rpm离心5min；
4.弃上清，加入5ml培养基重悬细胞后转入T25培养瓶中，轻轻晃匀；
5.置于37°C，5% CO2培养箱中培养(培养瓶盖没有透气孔的话，瓶盖不要拧太紧)；
6.第二天，用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养。
收到复苏好的贴壁细胞的处理方法：
1. 先从外包装盒拿出细胞瓶，在细胞瓶表面喷一层酒精，并小心去掉封口膜；
2. 在显微镜下观察细胞状态，并确定是否染菌，如有染菌，请立即拍照，并将细胞丢掉；
3. 将培养瓶置于37°C，5% CO2的无菌培养箱中培养4-6小时；
4. 倒掉多余的培养基，留正常体积的培养基；
5. 重新将培养瓶置于37°C，5% CO2的无菌培养箱中培养过一夜；
6. 第二天传代。 
注：（1），观察细胞Z好在低倍镜（4或5X物镜）下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。
(2)，瓶中运输培养基不能重复再用，请换用加双抗或无双抗的新培养基，细胞冻存后，培养基中可不加任何抗生素。
(3)，有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞脱落，可离心吹打后接种到新瓶内。

人白血病T细胞;Jurkat细胞实验步骤培养细胞培养注意如下：
【培养液出现沉淀，但pH值不变】用洗涤剂清洗后残留磷酸盐将培养基成分沉淀下来。冰冻保存培养液，用去离子水反复冲洗玻璃器皿，然后CJ，将培养液加热到37℃，摇动使其溶解如沉淀仍然存在，丢弃培养液。
【培养液出现沉淀，同时pH 发生变化】细菌或真菌污染，丢弃培养物或用抗生素CJ。
【培养细胞不贴壁】胰蛋白酶消化过度；支原体污染；培养液中无贴壁因子，缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度，分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。
【悬浮细胞成簇】培养液中含钙、镁离子。支原体污染。蛋白酶过度消化使得细胞裂解释放DNA，用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞，轻轻吹吸细胞获得单细胞悬液，分离培养物，检测支原体。如发现支原体污染，丢弃培养物，用DNase I处理细胞。
【原代细胞培养物污染】原代培养组织在进入培养前已污染，培养前用含高浓度抗生素的平衡盐溶液反复冲洗组织。
【培养细胞死亡】培养箱内无CO2。培养箱内温度波动太大。细胞冻存或复苏过程中损伤。培养液渗透压不正确。培养液种有毒代谢产物堆积；检测培养箱内CO2检查培养箱内温度；取新的保存细胞种；检测培养液渗透压。注意：大多数哺乳动物细胞能耐受渗透压为260–350mOsm/kg。加入额外试剂如HEPES或药物都有可能影响培养液渗透压，换入新鲜培养液。
【培养细胞生长减慢】由于更换不同培养液或血清。培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子耗尽或缺乏或已被破坏。培养物中有少量细菌或真菌污染。试剂保存不当。

常见问题及解决方案
1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。  2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

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细胞生长：
细胞数量：100万个细胞数
细胞传代：1:10传代2~3天1次
细胞纯度：92％
细胞检测：细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
细胞冻存：液氮冻存（基础培养基+10%DMSO+20%FBS）
细胞运输：干冰运输（1 Vial）或活细胞运输（T-25 flasks）
细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和ZL
我们有细胞库和专业实验室无菌操作，同时接受客户复苏、委托培养服务，并提供细胞的科研项目解决方案以及实验服务。购买我司细胞的客户请先与公司细胞销售人员核实订购的细胞株名称、种属、货号、数量、协商细胞价格并预约发货期与提取方式。向销售人员索取细胞株说明书并认真阅读以方便你的实验操作。