人宫颈癌多药耐药细胞;SiHa/VP16图片【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和ZL。
细胞名称 人宫颈癌多药耐药细胞;SiHa/VP16图片
形态特性 上皮细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性 该细胞属专利保藏,其特征特性尚未公开。
培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
传代方法 1:3传代,3-4天传1次
传代情况 C3
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR
同工酶
染色体
使用权限 未定
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L),90%;优质胎牛血清,10%。
2、培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二、细胞处理:
1、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养)。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1)弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,进口来源,保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。 细胞到达客户手中,1个月内出现任何问题,导致细胞在冻存前死亡,我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤:
1)贴壁细胞传代:提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内,吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞,加入适量胰酶,使胰酶的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止胰酶作用,用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。
2)悬浮细胞传代:将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min,弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。
131102-5生物素化兔 IgG5mg
130987D-5接头 DNA(Sal I-Sma I)5nmol
小鼠单核细胞分离液 1.090200mL
即用型封堵液 (NC 专用 ) 50mL
台盼蓝5g
ApaI2000U
CAS72-57-1台盼蓝5g
100878-100Western 印迹膜封膜液 ( 尼龙膜 )100mL
φ29 DNA 聚合酶250U
MgSO4溶液,10mM,PCR 5mL
10 μL RNase-free 白吸头 ( 袋装 )1000 支
总谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒100 次
GX E.coli 感受态细胞制备试剂盒20 次
140588-250Verhoeff 固定液250 mL
130977-5生物素标记的 Oligo(dT)5μg
凝血酶1000U
ADP/ATP 发光法细胞活力检测试剂盒200 次
Mito-Tracker Green( 线粒体绿色荧光探针 )50μL
线状 DNA 清除剂30 次人卵清蛋白特异性IgE(OVA sIgE)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
人可替丁(Cotinine)ELISA试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
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人抗核周因子抗体(APF)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
人氨酸酶(Arg)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
人基质金属蛋白酶8/中性粒细胞胶原酶(MMP-8)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
人骨粘连蛋白(ON)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
人富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61)ELISA试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
人低密度脂蛋白(LDL)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
人垂草扁桃酸(VMA) ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
人鼻咽(NPC)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
人白介素13(IL-13)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
人α干扰素(IFN-α)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
人Dickkopf 1(DKK1)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
人5脂加氧酶(5-LO/LOX)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
犬骨桥素(OPN)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
牛甘胆酸(CG)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
鸡血管活性肠肽(VIP)ELISA试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装