100rxns Taq DNA polymerase

产品组成

产品说明： 本产品是94 kDa的耐热性DNA聚合酶及配合其使用的10×PCR Buffer以及6×Loading Buffer。是将改良后的DNA Polymerase的基因经过克隆转化到大肠杆菌中进行表达后，分离纯化而得到的性状优良，功能强大的DNA聚合酶。它比天然Taq DNA聚合酶有更加强大的功能以及更加高质量的活性。具有扩增速度快、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点。使用本产品扩增得到的PCR产物的3′端会进行加“Ａ”处理，因此，PCR产物可直接用于T载体的酶连中。

活性定义： 一个单位（U）的DNA聚合酶的活性定义为在74℃，30分钟内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，摄入10nmol的全核苷酸所需的酶量。

质量控制： SDS-PAGE检测纯度大于99%；经检测无外源核酸酶活性；PCR方法检测无宿主残留DNA；能有效扩增人类基因组中的单拷贝基因；室温放置一周，活性无明显改变。

适用范围： 一般DNA 的片段的扩增、DNA标记、DNA序列测定。

建议的PCR反应体系： （以50μl反应体系为例）        

50 μl PCR反应体系中模板DNA推荐使用量

建议的PCR反应条件

注意事项：

1、本产品提供的酶量可进行多次反应，配置过程应将酶尽量放在-20℃冰盒中。

2、PCR的反应液请在冰上配制，然后置于PCR扩增仪上进行PCR反应。这种冷启动法（Cool Start Method）可增强PCR扩增的特异性，减少PCR过程中的非特异性反应，能得到良好的PCR结果。

3、PCR反应后，加入本产品提供的6×Loading Buffer按5:1混合均匀后加入凝胶孔进行电泳。

Taq DNA polymeraseTaq DNA polymerase

可能出现的问题及解决方案：

1. 假阴性，不出现扩增条带
   　　PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备②引物的质量与特异性③酶的质量 ④PCR循环条件。寻找原因应逐个排除。
2. 假阳性
   　　出现的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致，有时其条带更整齐，亮度更高。原因可能是引物设计不合适：选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性，因而在进行PCR扩增时，扩增出的PCR产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出现假阳性。需重新设计引物。
3. 出现非特异性扩增带
   　　PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带 与非特异性扩增带。其原因：一是引物与靶序列不完全互补、 或引物聚合形成二聚体。二是Mg²⁺浓度过高、退火温度过低，及PCR循环次数过多有关。Mg²⁺浓度或者重新设计引物即可解决。
4. 出现片状拖带或涂抹带
   　　PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往由于酶量过多或酶的质量差，dNTP浓度过高，Mg²⁺浓度过高，退火温度过低，循环次数过多引起。也需逐个排除。