实验原理
早期的shRNA载体多采用RNA聚合酶III型启动子介导shRNA的表达，RNA聚合酶III型启动子如鼠源的U6启动子和人源的H1启动子可以在哺乳动物细胞中表达小分子RNA。随着miRNA干扰机制的深入研究，发展出第二代shRNA载体，即采用RNA聚合酶II型启动子CMV表达含侧翼序列的miRNA模拟物。该载体模拟miRNA的加工，表达出来的shRNA进入RISC沉默复合物的效率要比RNA聚合酶III型启动子表达的shRNA高数十倍，YZ效率更好，且可以和EGFP协同表达，方便观察转染效率。
实验流程
RNAi载体构建及筛选
载体构建
（真核、原核）
载体构建技术是分子生物学研究的常用手段，可依据具体实验要求完成各类载体的构建及改造
pAxEFwtit2腺病毒载体的构建质粒DNA
pAxCALNLwtit2 DNA/RE腺病毒载体的构建质粒DNA(Cre/LoxP System)
pAxcwit2 DNA/RE腺病毒载体的构建质粒DNA
pAxEFwtit2腺病毒载体的构建质粒DNA
pAxCALNLwtit2 DNA/RE腺病毒载体的构建质粒DNA(Cre/LoxP System)
pAxCAwtit2 DNA/RE 腺病毒载体的构建质粒DNA
pAxcwit2 DNA/RE腺病毒载体的构建质粒DNA
靶基因鉴定：luciferase报告基因表达载体的构建与检测
miRNA过表达载体的构建方法
慢病毒载体的构建
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