描述
NanoDrop ND-2000超微量分光光度计是NanoDrop的新产品,应用液体的表面张力特性,样品体积只需要0.5~2UL,在侦测台上,经上下臂的接触拉出固定的光径达到快速、微量、高浓度、免石英管、免毛细管等耗材侦测吸收值的优点。它使用高能量氙灯(pulsed xenon flash lamp)可提供190~840nm 的全光谱侦测,且不需要暖机,开机后立即使用。搭配高感度CCD array 侦测器,侦测吸收值可高达300ABS(dsDNA浓度2~15000ng/UL),大部分纯化后的核酸几乎都不需要稀释即可侦测。
待测样品的均质性是NanoDrop 2000的Z高要求,一般核酸、蛋白质样品能在侦测前以
vortex mixer震匀为,若无vortex mixer也应以pipette吸放数次混匀。若担心genomicDNA可能因前述动作而断裂,则改以55?C加热约一分钟,使样品在侦测前呈现均匀状态,以确保2UL具有代表性。
侦测时选择不同侦测模式,可以得到快速的结果:
●Nucleic Acid–吸收光谱、230nm,260nm,280nm吸收值(换算成10mm 光径吸收值)、260/280 ratio、260/230 ratio及核酸浓度。
●UV-Vis–190~840nm间所有波长的吸收值及光谱(以1mm光径吸收值呈现)。
●A280蛋白质定量法–280nm吸收值(换算成10mm光径吸收值)、260/280 ratio及蛋白质浓度。仅适用于纯化后的蛋白质,须具有已知的质量消光系数(mass extinctioncoefficient)方可计算。
●BCA、Bradford及Lowry–依不同呈色剂提供不同波长吸收值结果,自动画出标准曲线并计算R square,待测蛋白质浓度。
*蛋白质侦测模式目前提供BCA、Bradford 及Lowry三种常见定量呈色剂,因呈色剂随时间会逐渐加深,使用前请详阅试剂说明书并制备不同浓度的标准品,在时间内完成侦测,以得到良好的标准曲线。每个标准曲线多可有七个标准品,每个标准品多可做五重复。
*测蛋白质时样品体积需使用2UL,每个样品侦测后需以labwipe 擦拭15~20回,以避免呈色剂与蛋白质的残留。
二、技术参数:
1、波长范围:190-840nm;
2、波长精度:1nm;
3、分辨率:<1.8nm(FWHM at Hg 253.7nm);
4、其它:1mm光程长度(可自动调整到0.05mm);
5、检测下限:2ng/μl(dsDNA);
6、检测上限:15000ng/μl(dsDNA);
7、吸光率精确度:0.002 absorbance(1mm光程);
8、吸光率准确性:2%(at 0.76 at 257nm);
9、吸光率范围:0.02-300(相当于10mm光程);
10、核酸检测周期:<5s;
11、体积:14cm×20cm.