PRS-00070hu 小鼠谷氨酸（ Glu） 酶联免疫分析试剂盒

小鼠谷氨酸（ Glu） 酶联免疫分析试剂盒

本试剂仅供研究使用 目的： 本试剂盒用于测定小鼠血清， 血浆及相
关液体样本中谷氨酸（Glu）含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠谷氨酸（ Glu） 水平。 用纯化的小鼠谷氨酸
（ Glu） 抗体包被微孔板， 制成固相抗体， 往包被单抗的微孔中依次加入谷氨酸（ Glu）， 再
与 HRP 标记的谷氨酸（ Glu） 抗体结合， 形成抗体-抗原-酶标抗体复合物， 经过彻底洗涤后
加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色， 并在酸的作用下转化成Z终的黄
色。 颜色的深浅和样品中的谷氨酸（ Glu） 呈正相关。 用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度
（ OD 值）， 通过标准曲线计算样品中小鼠谷氨酸（ Glu） 浓度。
试剂盒组成：
 

样本处理及要求：
1.血清： 室温血液自然凝固 10-20 分钟， 离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转/分）。 仔细收集上
清， 保存过程中如出现沉淀， 应再次离心。
2.血浆： 应根据标本的要求选择 EDTA、 者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂， 混合 10-20 分钟后，
离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转/分）。 仔细收集上清， 保存过程中如有沉淀形成， 应该再
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次离心。
3.尿液： 用无菌管收集， 离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转/分）。 仔细收集上清， 保存过程中
如有沉淀形成， 应再次离心。 胸腹水、 脑脊液参照实行。
4.细胞培养上清： 检测分泌性的成份时， 用无菌管收集。 离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转/
分）。 仔细收集上清。 检测细胞内的成份时， 用 PBS（ PH7.2-7.4） 稀释细胞悬液， 细胞浓
度达到 100 万/ml 左右。 通过反复冻融， 以使细胞破坏并放出细胞内成份。 离心 20 分钟
左右（ 2000-3000 转/分）。 仔细收集上清。 保存过程中如有沉淀形成， 应再次离心。
5.组织标本： 切割标本后， 称取重量。 加入一定量的 PBS， PH7.4。 用液氮迅速冷冻保存备
用。 标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。 加入一定量的 PBS（ PH7.4）， 用手工或匀浆器将
标本匀浆充分。 离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转/分）。 仔细收集上清。 分装后一份待检测，
其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取， 提取按相关文献进行， 提取后应尽快进行实验。 若不能马上
进行试验， 可将标本放于-20℃保存， 但应避免反复冻融.
7. 不能检测含 NaN3 的样品， 因 NaN3 YZ辣根过氧化物酶的（ HRP） 活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释与加样： 在酶标包被板上设标准品孔 10 孔， 在*、 第二孔中分别加标
准品 100μl， 然后在*、 第二孔中加标准品稀释液 50μl， 混匀； 然后从*孔、 第二
孔中各取 100μl 分别加到第三孔和第四孔， 再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50μl，
混匀； 然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 弃掉， 再各取 50μl 分别加到第五、 第六孔
中， 再在第五、 第六孔中分别加标准品稀释液 50ul， 混匀； 混匀后从第五、 第六孔中各
取 50μl 分别加到第七、 第八孔中， 再在第七、 第八孔中分别加标准品稀释液 50μl， 混
匀后从第七、 第八孔中分别取 50μl 加到第九、 第十孔中， 再在第九第十孔分别加标准
品稀释液 50μl， 混匀后从第九第十孔中各取 50μl 弃掉。（ 稀释后各孔加样量都为 50μl，
浓度分别为 15μmol/L， 10μmol/L ， 5μmol/L， 2.5μmol/L， 1.25μmol/L）。
2. 加样： 分别设空白孔（ 空白对照孔不加样品及酶标试剂， 其余各步操作相同）、 待测样
品孔。 在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl， 然后再加待测样品 10μl（ 样
品Z终稀释度为 5 倍）。 加样将样品加于酶标板孔底部， 尽量不触及孔壁， 轻轻晃动混
匀。
3. 温育： 用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液： 将 30（ 48T 的 20 倍） 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30（ 48T 的 20 倍） 倍稀释后备用。
5. 洗涤： 小心揭掉封板膜， 弃去液体， 甩干， 每孔加满洗涤液， 静置 30 秒后弃去， 如此
重复 5 次， 拍干。
6. 加酶： 每孔加入酶标试剂 50μl， 空白孔除外。
7. 温育： 操作同 3。
8. 洗涤： 操作同 5。
9. 显色： 每孔先加入显色剂 A50μl， 再加入显色剂 B50μl， 轻轻震荡混匀， 37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止： 每孔加终止液 50μl， 终止反应（ 此时蓝色立转黄色）。
11. 测定： 以空白孔调零， 450nm 波长依序测量各孔的吸光度（ OD 值）。 测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。
注意事项：
1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用， 酶标包被板开封后如未
用完， 板条应装入密封袋中保存。
2． 浓洗涤液可能会有结晶析出， 稀释时可在水浴中加温助溶， 洗涤时不影响结果。
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3． 各步加样均应使用加样器， 并经常校对其准确性， 以避免试验误差。 一次加样时间Z好
控制在 5 分钟内， 如标本数量多， 推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线， Z好做复孔。 如标本中待测物质含量过高（ 样本 OD 值
大于标准品孔*孔的 OD 值）， 请先用样品稀释液稀释一定倍数（ n 倍） 后再测定， 计
算时请Z后乘以总稀释倍数（ ×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用， 以避免交叉污染。
6． 底物请避光保存。
7． 严格按照说明书的操作进行， 试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8． 所有样品， 洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9． 本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异， 以英文说明书为准。
计算：
以标准物的浓度为横坐标， OD 值为纵坐标，
在坐标纸上绘出标准曲线， 根据样品的 OD
值由标准曲线查出相应的浓度； 再乘以稀释
倍数； 或用标准物的浓度与 OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式， 将样品的 OD 值
代入方程式， 计算出样品浓度， 再乘以稀释
倍数， 即为样品的实际浓度。

小鼠谷氨酸（ Glu） 酶联免疫分析试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.990 以上。
2.批内与批间应分别小于 9%和 11%
检测范围：
0.5μmol/L -20μmol/L
灵敏度：
0.1μmol/L
保存条件及有效期：
1.保存： ； 2-8℃。
2． 有效期： 6 个月