盐酸克仑特罗（瘦肉精）检测试剂盒
样品处理
样品处理方法1
组织、肉样（纯精肉）、内脏样品的处理方法:
１．称2克匀浆过的样品加入2 mL溶液１(无色无味)，搅拌或震荡样品，使之混合均匀。
2. 加入6 ml溶液2(淡黄色,具刺激性气味)，推荐用干净的卫生筷或竹签搅拌样品5分钟；或振荡15分钟，使其均匀分布于溶液中。
3．3000g离心10分钟。
4. 取3ml上清液于干净平皿中,60℃恒温箱蒸干(30分钟左右)；也可在试管中直接水浴加热蒸干。
5．残留物用1ml 溶液2 (无色无味) 冲洗溶解。
6．3000g离心10分钟。
7．取清亮中间部分50ul直接加样, ELISA进行分析。
注：如果不慎将溶液弄到皮肤上，请立即用７５％的医用酒精棉花擦拭，并用清水冲洗。切勿饮用及溅入眼睛。
样品处理方法2 （更快速）
1、称2克匀浆过的样品加入2 mL溶液１(无色无味)，搅拌或震荡样品，使之混合均匀。
2、加入4mL溶液2 (淡黄色,具刺激性气味)，强烈振荡，肉样约2分钟，组织约6分钟。
3、3000g离心5分钟。
4、取1 ml上清液于干净平皿中，70℃~80℃恒温箱蒸干(约需5分钟左右)。或用电吹风，只需3分钟。
5、残留物用0.5 ml 溶液3 (无色无味) 冲洗，将底部白色残留物全部洗入溶液。
6、取洗脱液50ul作检测用。
酶标免疫分析程序
1. 测定之前注意事项
a) 使用之前将所有试剂回升至室温20-25℃
b) 使用之后立即将所有试剂放回2-8℃
c) 在使用中不要让微孔干燥
d) 在ELA分析中的重复性，很大程度上取决于洗板的一致性，仔细按照推荐的洗板顺序操作是ELA测定程序中的要点
e) 在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖子盖住微孔板
2.酶标记物与微孔板条
a) CLE- 酶标记物 提供的CLE- 酶标记物为浓缩液。由于稀释的酶标记物稳定性不好，所以只稀释实际需用量的酶标记物1：14稀释（1μl酶标液加14μlPBS）。在吸取浓缩液之前，要仔细地振摇，剩余的仍放置2-8℃保存。
b)微孔板条 取出需用数量的微孔板及框架，将不用的微孔板用胶带封好，放进原袋中重新密封，4℃或-20℃保存，谨防受潮。
3. 标准液 提供的CLE标准液浓度为0, 0.1, 0.3, 0.9, 2.7, 8.1ppb(ng/ml)
4. 测定程序（室温25℃条件下操作）
a) 剪开铝箔袋，将足够标准和样品所用数量的孔条插入微孔架，标准和样品做两个平行实验，记录下标准和样品的位置。加入20μl的标准液或处理好的样品到各自的微孔中。如果微孔板条一次实验用不完，放回原铝箔袋中封紧，再套一个塑料自封袋夹紧后4℃或-20℃保存，切忌受潮。
b) 加入100μl稀释的酶标记物到微孔底部，25℃孵育30分钟（推荐使用恒温箱）。
c) 倒出孔中的液体，将微孔架倒置在吸水纸上拍打（每行拍打3次）以保证完全除去孔中的液体，用250μl PBST充入孔中，再次倒掉微孔中液体，再重复操作两次。每次洗板应加入洗液后等2分钟再倒掉。推荐使用洗瓶洗板，这样可加快速度，避免板条间的孵育时间不一致而产生OD值的差异。
d) 反应底物与显色试剂以1：1混合后加入100μl到微孔中，充分混合并在25℃暗处孵育15分钟。
e) 加入50μl反应停止液到微孔中，混合好在450nm 处测量吸光度值，必须在加入停止液后10分钟内读取光度值。
结果
所获得的标准和样品吸光度值的平均值除以一个标准（0标准）的吸光度值再乘以100，因此0标准等于并且以百分比的形式给出吸光度值。
标准的吸光度值（或样品）
----------------------- ×100 = %吸光度值
0标准的吸光度值
计算的标准值绘成为一个对应CLE浓度（ng/g,或ng/ml）的半对数坐标系统曲线图，校正曲线在0.2-2ng/g(ppb)范围内应当成为线性。相对应每一个样品的浓度（ng/g, 或ng/ml）可以从校正曲线上读出。
灵敏度
克伦特罗测定试剂盒的平均检测下限约为0.1ng/g（0.1ppb）。
特异性
与克伦特罗类似物的交叉反应：
克伦特罗(Clenbuterol)
溴布特罗(brombuterol) 110%
塞布特罗(cimbuterol ) 40%
马喷特罗(mapenterol) 17%
马布特罗(mabuterol) 16%
沙丁胺醇(salbutamol) 9%
妥布特罗(tulobuterol) 2% 特布他林(terbutalin) 2%
莱克多巴胺 <1%
异丙肾上腺素(Isoproterenol) <1%
肾上腺素(Adrenalin ) <1%
去甲肾上腺素(Noradrenalin) <1%
回收率
回收率为90%±15%
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沪公网安备 31011502008050号
