caspase-3检测试剂盒 NucView 488 caspase-3 双功能检测试剂盒

NucView 488
双功能荧光底物实现活细胞 Caspase-3 活性检测并同时染色细胞核DNA

特点：
在活细胞中检测Caspase-3并染色细胞核DNA
直接加入细胞培液,孵育15-30分钟后即可检测，无需清洗残余染料
兼容使用荧光素滤光片的流式细胞仪和荧光显微镜。
可固定染色

DEVD-NucView 488 Caspase-3 底物是Biotium公司开发的一系列在活细胞内实时检测Caspase活性的NucView Caspase 底物中的一个产品。不同于传统的caspase酶检测方法，Biotium 公司发明了一种创新的荧光底物设计技术，将底物的一部分连接到功能性染料上，从而使这些染料失去功能。利用这种方法设计的荧光底物在酶切之后，染料能被释放出来恢复功能并能结合目标分子释放荧光（图2）。
对于DEVD-NucView 488 Caspase-3底物，Biotium 将一段带有大量负电荷的DEVD肽连接到一种和DNA结合的染料上。这些负电荷使得该染料不能结合DNA，也就不能产生荧光（图6）。这种底物可以快速的穿过细胞膜进入细胞质并在这里被Caspase-3剪切，从而释放出和DNA有高亲和力的染料。释放出来的染料可以迁移进入细胞核并把细胞核染成亮绿色（图1）。因此，这种双功能底物让研究人员在凋亡细胞内检测Caspase-3活性的同时染色细胞核，显示细胞核在凋亡过程中经历的形态学变化。在众多凋亡的细胞内，不同细胞可能处在不同时期并经历着凋亡过程中的不同事件，因而研究中很

重要的一点就是能实时独立的跟踪这些事件，从而更好的了解事件之间的相互关系。DEVD-NucView 488 Caspase-3底物结合Biotium公司开发的其他荧光探针，是通过荧光显微镜和/或者流式细胞仪来研究这些不同事件的时间、空间关系的强有力工具（图4）。

Biotium公司现提供两种活细胞Caspase-3检测试剂盒。产品＃30029包含DEVD-NucView 488 Caspase-3底物和Caspase-3YZ剂，足够在流式细胞仪或荧光显微镜上进行至少100次实验。产品＃30030是一种双凋亡检测方法试剂盒，包含DEVD-NucView 488 Caspase-3底物和用来检测磷酸化丝氨酸（PS）转位的红色荧光sulforhodamine 101-annexin V，足够在流式细胞仪或荧光显微镜上进行至少50次实验。使用两种产品的具体实验步骤可以从Biotium网站上下载。

图4. 在Staurosporine诱导不同凋亡时间（分别为1小时，2.5小时和5小时）后，使用DEVD-NucView 488 Caspase-3底物孵育Jurkat细胞，并用流式细胞仪检测Jurkat细胞Caspase-3活性。每次分析前，用DEVD-NucView 488 Caspase-3底物（10μM）孵育诱导后的细胞15分钟。在0时刻（未用Staurosporine诱导作为对照）Caspase-3阳性细胞百分比为0％（红色），1小时为10％（蓝色），2.5小时为80％（紫色），5小时为97％（天蓝色）。		图5. Staurosporine诱导的Hela细胞在37℃下用1μM的DEVD-NucView 488 Caspase-3底物孵育30分钟后用通常的3.7%甲醛固定。固定后的细胞破膜并用sulforhodamine 101-phalloidin（Texas Red-phalloidin）（#00033）染色。调亡细胞的细胞核DNA被酶反应释放的染料染成绿色，同时所有细胞被F-actin结合的phalloidin染成红色。

图6. 用稀释在pH7.4 TE缓冲溶液中的dsDNA滴定NucView 488 Caspase-3底物（1μM）和它的酶切产物（1μM）。用荧光酶标仪监测530nm荧光信号（475nm激发）。
Table 1. NucView Caspase 检测产品

Cat#	Product Name	Unit Size	Unit Price	品 Pai
30067	Dual Apoptosis Assay with NucView 488 Caspase-3 Substrate and CF594-Annexin V	50 assays	¥3822	Biotium
70055	MitoView 633	20 X 50ug	¥1764	Biotium
70054	MitoView Green	2050ug	¥1764	Biotium
30062	NucView 488 and MitoView 633 Apoptosis Kit	100 assays	¥3822	Biotium
30029	NucViewTM 488 Caspase-3 Assay Kit for live cells	100 assays	¥3822	Biotium
10403	NucViewTM 488 Caspase-3 Enzyme Substrate 1mM in 1X PBS	100 uL	¥3493	Biotium
10402	NucViewTM 488 Caspase-3 Enzyme Substrate 1mM in DMSO	100 uL	¥3493	Biotium
30030	NucViewTM 488 caspase-3 substrate and sulforhodamine 101-annexin V (also called Texas RedTM-annexin V) dual apoptosis assay kit	50 assays	¥3822	Biotium

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